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碘化丙啶 PI 染色液（50µg/ml）

產(chǎn)品貨號：G6230

產(chǎn)品規(guī)格：10ml/50ml

產(chǎn)品簡介：

  碘化丙啶染色(PI stain)可以對細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡進行分析。碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI)是一種可以嵌 合到雙鏈DNA和RNA的堿基對中并與之結(jié)合的熒光染料,，無堿基特異性,。碘化丙啶與雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生 熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比,。細(xì)胞內(nèi)的DNA被Propidium Iodide染色后,，可以用流式細(xì)胞儀對 細(xì)胞進行DNA含量測定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況,，可以進行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的分析,。碘化丙啶染色 后，假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強度為1,，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強度的理論值為2,，正在 進行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強度為1～2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA的片段化(DNA fragmentation)導(dǎo)致部分基因組

   DNA的片斷在染色過程中丟失,，因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染,，即熒光強度小于1，在流式檢 測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰,，即凋亡細(xì)胞峰,。細(xì)胞凋亡時，流式細(xì)胞檢測可呈現(xiàn)亞二倍體核型的特征,，根 據(jù)光散射的特點,，PI染色可以區(qū)分細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死的細(xì)胞峰型。細(xì)胞凋亡時,，出現(xiàn)凋亡細(xì)胞皺縮,、染色質(zhì)濃 縮、核碎裂,，產(chǎn)生凋亡小體,，使細(xì)胞的前向光散射低于正常。在細(xì)胞凋亡的早期,，細(xì)胞對前向角光散射的能力顯 著降低,，對側(cè)向光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期,，前向和側(cè)向光散射的信號均降低,。細(xì)胞壞死 時細(xì)胞多表現(xiàn)為細(xì)胞腫脹，因此前向光散射高于正常,，對側(cè)向光散射高于正常,。

  尚寶生物 碘化丙啶PI染色液(50μg/ml)主要由PI、破膜劑等組成,，經(jīng)常用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周 期與細(xì)胞凋亡檢測,，亦可用于區(qū)分細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死,。PI染色液工作濃度為20～50μg/ml，不含RNase,，*用 于RNA染色,，細(xì)胞檢測含量范圍一般為0.1～1×10⁶之間。

產(chǎn)品內(nèi)容:

自備材料：

1. 胰蛋白酶消化液

2. 流式細(xì)胞儀

3. PBS

4. 預(yù)冷固定液：預(yù)冷的70%乙醇或4%多聚甲醛

操作步驟（僅供參考）：

1. 細(xì)胞樣品的制備：

⑴貼壁細(xì)胞：

① 小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一個無菌離心管內(nèi)備用,。

② 用胰蛋白酶消化細(xì)胞至可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液,，吹打下所有的 貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞,。

③ 收集上述細(xì)胞懸液到離心管內(nèi),。

④ 4℃，1000g離心3～5min,，使細(xì)胞沉到管底,。小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl培養(yǎng)液,，以免吸走細(xì)胞,。

⑤ 加入約1ml提前預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞,，并轉(zhuǎn)移至1.5ml無菌離心管,。

⑥ 4℃，1000g離心3～5min,，使細(xì)胞沉到管底,。

⑦ 小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl PBS,，以免吸走細(xì)胞,。

⑧ 輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團,。

⑵懸浮細(xì)胞：

① 4℃,，1000g離心3～5min，使細(xì)胞沉到管底,。

② 小心吸取上清并丟棄,，可留大約50μl培養(yǎng)液，以免吸走細(xì)胞,。

③ 加入約1ml提前預(yù)冷的PBS,，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至1.5ml無菌離心管,。

④ 4℃,，1000g 離心3～5min,，使細(xì)胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丟棄,，可留大約50μl PBS,，以免吸走細(xì)胞。

⑥ 輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞,，避免細(xì)胞成團,。

2. 細(xì)胞的固定：

  加入1ml冰浴預(yù)冷70%乙醇中，輕輕吹打混勻,，4℃條件下固定2h或更長時間,。4℃固定12～24h 可能效果更佳。

3. 細(xì)胞的清洗：

①4℃,，1000g 離心3～5min,，使細(xì)胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丟棄,，可留大約50μl溶液,，以免吸走細(xì)胞。

③ 加入約1ml提前預(yù)冷的PBS,，重懸細(xì)胞,，并轉(zhuǎn)移至1.5ml無菌離心管。

④4℃,，1000g離心3～5min,，使細(xì)胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丟棄,，可留大約50μl PBS,，以免吸走細(xì)胞。

⑥ 輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞,，避免細(xì)胞成團,。

4. PI染色：

  在每個待檢細(xì)胞樣品中加入500μl配制好的PI染色工作液，輕輕重懸細(xì)胞沉淀,，置于37℃避光水浴 30min,。

5. 檢測與分析：

  用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長488nm波長處檢測紅色熒光，同時檢測光散 染色結(jié)果： 凋亡細(xì)胞G1峰左側(cè)出現(xiàn)亞二倍體細(xì)胞群的峰型,，在光散射譜上,，前向光散射低于正常，側(cè)向光散射高于正常,。

注意事項：

1. 熒光染料都存在淬滅的問題,，建議染色后盡快檢測。

2. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液,。

3. 在為了獲得細(xì)胞沉淀的離心的過程中,，對于特殊細(xì)胞,，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)提高離心力或延長離 心時間,。

4. 如果用于組織的細(xì)胞周期不細(xì)胞凋亡檢測,，則必須把組織消化后，制備成單細(xì)胞懸液,，才可以進行檢測,。

5. 細(xì)胞凋亡時，凋亡細(xì)胞的標(biāo)志之一是DNA可染行降低,，但這種情況并是的,，DNA含量的降低或者 DNA 與染料結(jié)合能力下降也會導(dǎo)致 DNA 可染行降低，在分析的時候應(yīng)特別注意,。

6. PI對人體有一定刺激性,，請注意適當(dāng)防護。

7. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： -20℃儲存,，6個月有效,。4℃儲存, 1 個月有效。