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DNA 含量檢測試劑盒（細(xì)胞周期）

產(chǎn)品貨號：26350

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡介：

  細(xì)胞周期是指連續(xù)分裂細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個過程,。在這個過程中,， 細(xì)胞遺傳物質(zhì)復(fù)制并加倍，且在分裂結(jié)束時平均分配到兩個子細(xì)胞中去,。細(xì)胞周期又可以分為間期和有絲分裂期,， 細(xì)胞間期常劃分為休眠期（G0）,，DNA合成前期（G1），DNA合成期（S）,，DNA合成后期（G2）,，整個周期 可表示為G1→S→G2→M。DNA周期檢測可用來反應(yīng)細(xì)胞周期的各個期的狀況,，即細(xì)胞增殖狀況,。利用細(xì)胞內(nèi) DNA能夠和熒光染料（如碘化丙啶PI）結(jié)合的特性，細(xì)胞各個時期其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同,，流 式細(xì)胞儀檢測的熒光強(qiáng)度也不一樣,。

  細(xì)胞發(fā)生凋亡時，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮,，核裂解,，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化,。在細(xì)胞 凋亡的早期，細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低,，對90°角光散射的能力增加或沒有變化,。在細(xì)胞凋亡的晚期， 前向角和90°角光散射的信號均降低,。因此可以通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化來觀察凋亡細(xì)胞,。用PI對 細(xì)胞進(jìn)行染色，凋亡細(xì)胞由于總DNA量降低,，于正常G0/G1細(xì)胞群前出現(xiàn)DNA低染細(xì)胞群,，即G1峰前出現(xiàn)亞二 倍體峰（sub-G1）,即細(xì)胞凋亡群。

本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞（懸浮,、貼壁）的DNA含量（細(xì)胞周期）檢測,。

產(chǎn)品內(nèi)容:

操作步驟（僅供參考）：

1. 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡,，同時設(shè)立陰性對照組,，并收集細(xì)胞。

2. 用PBS洗滌細(xì)胞一次,，1500rpm,，5min離心收集，調(diào)整細(xì)胞濃度為 1×10 6 /ml,取1ml單細(xì)胞懸液,。

3. 制備的單細(xì)胞懸液離心后,，去除上清，在細(xì)胞中加入70%預(yù)冷乙醇500ul固定2小時至過夜,，4℃保存,，染色前 用PBS洗去固定液,；如需要，細(xì)胞懸液可用200目細(xì)胞篩網(wǎng)過濾一次,。

4. 細(xì)胞沉淀中加100µl RNase A溶液,，重懸細(xì)胞，37℃水浴30min,。

5. 再加入400µl PI染色液混勻,，4℃避光孵育30min。

6. 上機(jī)檢測,，記錄激發(fā)波長488nm處紅色熒光,。

注意事項(xiàng)：

1. 碘化丙啶（PI）染色液保存和使用過程中應(yīng)注意避光。

2. PI有毒,，操作時應(yīng)戴手套,，并避免污染。

3. 熒光染料都存在淬滅問題,，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測,。