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紅細(xì)胞裂解液(10×)
產(chǎn)品貨號(hào):T16121
產(chǎn)品規(guī)格:100ml/500ml
產(chǎn)品簡介:
在生物科研領(lǐng)域,經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞,。去除紅細(xì)胞的方法有多種,,如ACK LysisBuffer、Tris-氯化銨紅細(xì)胞 裂解液,、Gey's Lysis Buffer,。紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell LysisBuffer)是一種從人、鼠或其他哺乳動(dòng)物等體內(nèi)的 組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細(xì)胞的溶液,,其主要有效成分為 NH4Cl,。
尚寶生物 RBC Lysis Buffer(10×)配方經(jīng)過優(yōu)化不同于ACK Lysis Buffer,,在裂解無核紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損 傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。對(duì)于裂解,、去除有細(xì)胞核紅細(xì)胞,,例如鳥或禽類的紅細(xì)胞,效 果不佳,,裂解類似細(xì)胞時(shí),,不建議采用。該裂解液經(jīng)過濾除菌,,為10×的濃縮液,,使用1×RBC Lysis Buffer 處理 過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測,, 尤其適用于流式細(xì)胞檢測或需要高濃度裂解液的情況,。
產(chǎn)品組成:
名稱 規(guī)格 保存條件 RBC Lysis Buffer(10×) 100ml/500ml 4℃
自備材料:
1. 胰蛋白酶
2. 離心機(jī)
3. PBS、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液
操作步驟(僅供參考):
注意:絕大多數(shù)情況下,,應(yīng)使用無菌去離子水稀釋 RBC Lysis Buffer(10×)至 1×使用,流式細(xì)胞術(shù)除外,。
(一)組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作
1. 制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,,通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液,離心棄上清,。
2. 裂解:加入 3~5 倍細(xì)胞沉淀體積的 1×RBC Lysis Buffer,,輕柔吹打混勻,裂解 1~2min,。本操作步驟在 4℃ 條件下操作更佳,,亦可在室溫下操作。
3. 離心: 4℃,,400~500g 離心 5min,,棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作,。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,,可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 各一次。
5. 洗滌:根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量 PBS,、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻重懸沉淀,。4℃,,400~500g 離心 2~3min,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作,。所加入的 PBS,、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液 的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的 5 倍以上,。
6. 如有必要,,重復(fù)上述步驟 5 一次,共洗滌 1~2 次,。
7. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn),。
(二)組織細(xì)胞樣本的快速操作(無需洗滌)
1. 制備細(xì)胞懸液:新鮮組織經(jīng)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,,制備細(xì)胞懸液,離心棄上清,。
2. 裂解:加入細(xì)胞 5 倍細(xì)胞沉淀體積的 1×RBC Lysis Buffer,,輕柔吹打混勻,裂解 1~2min,。 本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,,亦可在室溫下操作。
3. 加入 15~20ml PBS,、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻,。
4. 離心:4℃,400~500g 離心 5min,,棄紅色上清,,本離心步驟亦可在室溫下操作。
5. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,,可以重復(fù)上述步驟 2~4 各一次,。
6. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計(jì)數(shù),、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn),。
(三)血液樣本的常規(guī)操作
1. 取新鮮抗凝血,400~500g 離心 5min,,棄上清,。
2. 裂解: 加入 6~10 倍細(xì)胞沉淀體積的 1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,,裂解 1~5min,。本操作步驟在 4℃ 條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特別提醒:對(duì)于鼠的血液,,裂解 1~2min 已經(jīng)足夠,,對(duì)于人的外周 血,宜延長裂解時(shí)間至 4~5min,,并且裂解過程中輕輕搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解,。)
3. 離心: 4℃,400~500g 離心 5min,,棄紅色上清,。本步驟亦可在室溫下操作。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,,可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次,。
5. 洗滌: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量 PBS、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,,輕柔混勻重懸沉淀。4℃,,400~500g 離心 2~3min,,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作,。所加入的 PBS,、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液 的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的 5 倍以上,。
6. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn),。
注意:對(duì)于微量或少量的血液樣本,,可以不用第 1 步操作,可直接加入 10 倍血液體積的 ACK Lysis Buffer 進(jìn) 行第 2 步操作,,并在 4℃或室溫裂解 4~15min,。對(duì)于鼠的血液,裂解 4~5min 已經(jīng)足夠,; 對(duì)于人的外周血,,宜 延長裂解時(shí)間至 10min,但通常不宜超過 15min,,并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解,。
(四)血液樣本的快速操作(無需洗滌)
1. 新鮮抗凝血中加入 10 倍體積的 1×RBC Lysis Buffer,輕輕吹打混勻,,裂解 4~15min,。 本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特別提醒:對(duì)于鼠的血液,,裂解 4~5min 已經(jīng)足 夠,,對(duì)于人的外周血,宜延長裂解時(shí)間至 10min,,但通常不宜超過 15min,,并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅 細(xì)胞裂解。)
2. 加入 20~30ml PBS,、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻,。
3. 400~500g 離心 5min,,棄紅色上清。4℃離心效果更佳,。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,,可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。
5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,,進(jìn)行計(jì)數(shù),、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng):
1. 制備細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,,不一定要制備成單細(xì)胞懸液,。
2. 后續(xù)試驗(yàn)如果是用于細(xì)胞培養(yǎng),操作過程中應(yīng)注意無菌操作,,盡量在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作,。
3. 離心步驟盡量在 4℃離心機(jī)上操作。
4. 常規(guī)步驟不快速步驟的區(qū)別在于:常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心,,可以節(jié)省洗滌液的用量,,并且洗滌效 果也更好,不需要大體積的離心管,;快速步驟少了一次離心過程,洗滌效果略差一些,,同時(shí)需要大體積的離 心管,。
5. 離心洗滌后,通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的檢測,。
6. 如果經(jīng)過 1×RBC Lysis Buffer 處理后的樣品后續(xù)用于總 RNA 的提取,,在處理細(xì)胞時(shí)不必使用 DEPC 處理的 溶液,即無需在該操作中特意去除 RNase,。
7. 為了您的安全和健康,,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期:12 個(gè)月有效。
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