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胞漿蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：26161

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

 本試劑盒用于哺乳動物組織和細胞中提取胞質(zhì)蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,， 作用較為溫和,，可獲得蛋白，可用于免疫印跡實驗等基礎研究實驗,，由于含有上述的酶抑制劑,，不能用于研究蛋 白激酶和磷酸激酶的研究,。本品僅用于科研。

產(chǎn)品組成：

操作步驟:

1. 組織胞漿蛋白的提取

1) 在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑,、蛋白酶抑制劑和PMSF,；混勻，放置在冰上備用,；

2) 稱取0.1g的新鮮組織,，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎,，然后加入0.5-1ml 的新配置的裂解液,，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個過程注意冰上操作,；

3) 將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中,，4 ℃ 12000g 離心30min；

4) 吸取上清至新的管中,；

5) 進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗,。 （提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取,，避免反復凍融,，避免長時間儲存。）

2. 細胞胞漿蛋白的提取

1) 裂解液的用量：10 7個細胞需要裂解液1ml,；

2) 貼壁細胞：棄去培養(yǎng)基,，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS,，然后加入計算好的細胞裂解液,；在冰上用細胞刮刀 進行刮離細胞,，將刮離的細胞裂解液移入EP管中,，顛倒裂解20-30min。

3) 懸浮細胞：4℃ 400g 離心收集細胞,，用冷的PBS洗兩次細胞,，同樣按細胞數(shù)加入裂解液，渦旋10s,，放置冰 上裂解10min,，重復3-4次；

4) 裂解完畢之后,，將細胞裂解液4 ℃12000g 離心30min,；

5) 將上清移入新的EP管中；進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗,。 （提取好的蛋白建議保存于-80℃,，即用即取,，避免反復凍融，避免長時間儲存,。）

注意事項：

1. 實驗過程,，所有試劑都要需要預冷或者即融，保證操作過程中的低溫環(huán)境,。

2. PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加,，因為PMSF在水溶液中會快速降解。

有效期：至少一年,。