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細(xì)胞核蛋白提取試劑盒 200 次

產(chǎn)品貨號：26111

產(chǎn)品簡介：

  細(xì)胞核抽提試劑盒能夠簡單,、快速的提取來源于哺乳動物細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞漿蛋白,，所提取蛋白保持生物學(xué)活性。抽提獲得的核蛋白及漿蛋白純度高,，有效避免核/漿蛋白的交叉污染,，可以用于Western、Gel Shift,、報告基因檢測以及酶活力測定等后續(xù)操作,。

產(chǎn)品內(nèi)容：

操作步驟：

1.請在蛋白抽提前取出抽提試劑 A、B 和 C 進(jìn)行預(yù)冷

2.收集細(xì)胞,，計數(shù),。離心去上清。

3.1×10 7細(xì)胞中加入 0.5ml 細(xì)胞核抽提試劑 A,，渦旋 5 秒以充分混勻,，冰上孵育 10 分鐘。

注意：

  各種細(xì)胞的特性不同,，需要根據(jù)不同細(xì)胞的特性調(diào)整細(xì)胞核抽提試劑 A 的用量,，如果蛋白濃度 小，按比例減少細(xì)胞核抽提試劑 A 及后續(xù)細(xì)胞核抽提試劑 B,、C 的用量,。

4.4℃ 3000 rpm 離心 10min，吸棄上清,。

5.加入 374μL 細(xì)胞核抽提試劑 B,，再加入 26μL 細(xì)胞核抽提試劑 C

6.將步驟 5 中溶液加入玻璃勻漿管中，用玻璃勻漿管冰上反復(fù)勻漿 20 次,，冰上孵育 30min,。 7.4℃ 12,000 rpm 離心 20 分鐘，收集上清（盡量收集干凈上清液）至新的離心管中,，-20℃ 8.保存（此提取液為胞核蛋白）,。

注意事項：

1.如需提取磷酸化蛋白請在抽提試劑中加入磷酸酶抑制劑。

2.所有樣品操作請置于冰上進(jìn)行,。

3.可以采用更高的速度來離心,。

4.根據(jù)實驗需求，細(xì)胞核抽提試劑 A& B 使用前加入合適的蛋白酶抑制劑,。