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BCA 微量蛋白定量試劑盒說明書

產品貨號：34021

產品規(guī)格：1000 次

產品簡介：

  BCA 蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一,。本產品是基于 BCA（Bicinchoninic Acid）法研 制而成，實現(xiàn)了對蛋白質進行快速,、穩(wěn)定,、靈敏的濃度測定,。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質 分子中的肽鏈 結構能與 Cu 2+絡合生成絡合物，同時將 Cu 2+還原成 Cu +,。BCA 試劑可敏感特異地與 Cu +結合,，形成穩(wěn)定的有顏 色的復合物。在 562 nm 處有高的光吸收值,，顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,，可根據(jù)吸收值的大小來測定 蛋白質的含量。本試劑盒專為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設計,，可準確測定濃度為 0.2-100μg/ml 的蛋 白溶液,，試劑盒的靈敏性高，平行性好,，不同種蛋白之間的測量差異極低,。每個試劑盒可以檢測 1000 個樣 品。

包裝清單：

產品名稱 包裝 儲存條件 試劑 A 50ml 4℃ 試劑 B 50ml 4℃ 試劑 C 5ml 4℃ 蛋白標準(BSA) 5mg/ml 1ml -20℃保存

操作步驟：

1.蛋白標準品的準備 取適量 5mg/ml 蛋白標準,，用 PBS 稀釋至終濃度為 100μg/ml,。例如取 10μl 5mg/ml 蛋白標準，加入 490μl PBS 即可配制成 100μg/ml 蛋白標準,。蛋白樣品在什么溶液中,，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是 為了簡便起見,，也可以用 0.9% NaCl 或 PBS 稀釋標準品,。稀釋后的蛋白標準需-20ºC *保存。

2. 工作液配制

根據(jù)樣品數(shù)量,，按 1 體積試劑 C 加 25 體積試劑 B,，混勻后加 26 體積試劑 A，再次混勻（按照 C-B-A 的 順序加,，切勿更改加樣順序）,。配制適量 BCA 工作液，充分混勻,。

3. 蛋白濃度測定

a. 將標準品按 0,、5、10,、20,、40、60,、80、100μl 加到 96 孔板的標準品孔中,，加標準品稀 釋液 補足到 100μl,，相當于標準品濃度分別為 0,、5、10,、20,、40、60,、80,、100μg/ml。標準品濃度可根據(jù)實 際實驗需求更改,。

b. 加適當體積樣品到 96 孔板的樣品孔中,。如果樣品不足 100μl，需加標準品稀釋液補足 到 100μl,。請注意記錄樣品體積,。

c. 各孔加入 100μl 工作液，60ºC 放置 60 分鐘,。

d. 用酶標儀測定 A562,，或 540-595nm 之間的其他波長的吸光度。

e. 根據(jù)標準品濃度和 A562 值做出標準曲線,，根據(jù)標準曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白 濃度,。

常見問題：

1. 測定標準曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。 可能的原因是樣品中含有嚴重干擾 BCA 法測定蛋白濃度的物質,。

2. 是否每次測定時都需要做標準曲線,？ 建議每次測定時都做標準曲線。因為 BCA 法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深,，并且顯色反應的 速度和溫度有關,，所以除非準確控制顯色反應的時間和溫度，否則如需準確測定宜每次都做標準曲線,。

注意事項：

  需酶標儀一臺,，測定波長為 540-595nm 之間，*562nm ,。需 96 孔板,。如果沒有酶標儀，也可以使用 普通的分光光度計測定,，但測定時,，需根據(jù)比色皿的小檢測體積，適當加大 BCA 工作液的用量使不小于 小檢測體積,，樣品和標準品的用量可相應按比例放大也可不變,。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個 試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。

  如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景,，請試用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒,。

  EDTA 濃度必須小于 10mM，不兼容 EGTA,。不適用 BCA 法時,，請試用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。

  本產品*于專業(yè)人員的科學研究用,，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內,。

  為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作