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雙縮脲法蛋白質(zhì)含量檢測試劑盒說明書

產(chǎn)品貨號：R22025

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品簡介：

  樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算,。此外,，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。   強堿性溶液中,，雙縮脲與 CuSO4形成紫色絡(luò)合物,；紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與 蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān),，故可用來測定蛋白質(zhì)含量,。該方法測定范圍為 1~10mg 蛋白質(zhì)，適用于 蛋白質(zhì)濃度高的樣品,，尤其是動物材料,。

自備儀器和用品:

1. 可見分光光度計/酶標(biāo)儀

2. 移液器

3. 微量玻璃比色皿/96 孔板

4. 蒸餾水

試劑組成和配制：

試劑一：液體 20ml×1 瓶，4℃保存,。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1ml×1 支,，5 mg/ml，-20℃保存,。

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取:

1. 液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定,。

2. 組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））冰浴勻漿,，10000rpm,，4℃離 心 10min，取上清,，即待測液,。（動物樣品常常需要稀釋）

3. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞 加入 1ml 提取液）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w,，超聲 3 秒，間隔 7 秒,，總時間 3min）；然 后 8000rpm,，4℃,，離心 10min，取上清置于冰上待測,。

測定步驟:

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,，調(diào)節(jié)波長到 540 nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 空白管：取 0.5 mlEP 管,，加入 40ul蒸餾水，200ul試劑一,，混勻后室溫靜置 15 min,，取 200 ul于微量玻璃比色皿/96 孔板，540nm 比色,，記為 A1 空白管,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取 0.5 mlEP 管，加入 40ul標(biāo)準(zhǔn)液,，200ul試劑一,，混勻后室溫靜置 15 min，取 200 ul于微量玻璃比色皿/96 孔板,，540nm 比色,，記為 A2 標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 測定管：取 0.5 mlEP 管,，加入 40ul待測液,，200ul試劑一，混勻后室溫靜置 15 min,，取 200 ul于微量玻璃比色皿/96 孔板,，540nm 比色，記為 A3 測定管。

樣品中蛋白質(zhì)濃度計算：

1,、按液體體積計算：

蛋白質(zhì)（mg/ml）= C 標(biāo)準(zhǔn)管÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)×(A 測定管－A 空白管) =5÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)×(A 測定管－A 空白管)

2,、按樣本鮮重計算：

蛋白質(zhì)（mg/g 鮮重）= C 標(biāo)準(zhǔn)管÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)×(A 測定管－A 空白管) × V 樣總÷W             =5÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)×(A 測定管－A 空白管) ÷W

3、按細(xì)胞數(shù)量計算：

蛋白質(zhì)（mg/10 4 cell）= C 標(biāo)準(zhǔn)管÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)×(A 測定管－A 空白管) × V 樣總                ÷500 =0.01÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)×(A 測定管－A 空白管)

C 標(biāo)準(zhǔn)管：5mg/ml,；V 樣總：樣本總體積,，1ml；W：樣本鮮重,，g,；500：細(xì)胞總數(shù)，500 萬,。

注意事項：

1. 樣品蛋白濃度須在 1~10mg/ml 范圍內(nèi),，低于 1mg/ml 不能用此法，高于 10mg/ml 須做相應(yīng)稀釋,。因 此測定前用 1~2 個樣做預(yù)實驗,，確保蛋白濃度在 1~10mg/ml 范圍內(nèi)。

2. 待測樣品蛋白提取可用生理鹽水,、雙蒸水或不含蛋白的 PBS 提取,。該法受硫酸銨、Tris 緩沖液干擾,， 提取液中應(yīng)不含這些物質(zhì),；否則改用 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。