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瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：27101

產(chǎn)品規(guī)格：200 次

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

  本試劑盒采用新型硅基質(zhì)膜技術(shù)和試劑配方,，通過(guò)*的離心吸附柱快速的結(jié)合 DNA-洗滌-洗脫步驟即可從 普通或低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中回收純化 70 bp-30 kb 的 DNA 的片段,，溶膠速度快，回收率高,。溶膠液中含有 pH 指示 劑,，可根據(jù)顏色來(lái)判斷溶膠回收是否達(dá)到適用狀態(tài)。每個(gè)吸附柱可吸附高達(dá) 10μg 的 DNA,，同時(shí)有效去除引物,、 酶、礦物油,、瓊脂糖等雜質(zhì),。純化回收的 DNA 純度及濃度高,，完整性好，可直接用于測(cè)序,、連接和轉(zhuǎn)化,、標(biāo)記、 體外轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),。

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備試劑：

  使用前 Buffer PW 50 次加入 36ml 無(wú)水乙醇/100 次加入 72ml 無(wú)水乙醇/200 次加入 144ml 無(wú)水乙醇。

操作步驟：

1. 將單一目的 DNA 條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分）,，放入干凈的離心管（自備）中,，稱(chēng)量計(jì) 算凝膠重量（提前記錄離心管重量）。

2. 注意：若膠塊的體積過(guò)大,，可將膠塊切成碎塊,。

3. 向膠塊中加入 2 倍體積 Buffer PG（如凝膠重為 100 mg，其體積可視為 200μl,，依此類(lèi)推）,。

4. 57℃水浴溫育，其間每隔 2-3 分鐘溫和地上下顛倒離心管,，待溶膠液為黃色,，以確保膠塊充分溶解。如果還 有未溶的膠塊,，可再補(bǔ)加一些溶膠液或繼續(xù)放置幾分鐘直至膠塊*溶解,。

5. （可選步驟）當(dāng)回收片段<300 bp 時(shí)，應(yīng)加入 1/2 膠體積的異丙醇,，上下顛倒混勻（如凝膠重 100 mg,，則加 入 50μl 的異丙醇）。

6. 柱平衡：向已裝入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入 200μl Buffer PS,，12000 rpm 離心 1 分鐘,，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中,。

7. 將步驟 3 或 4 所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中,，室溫放置 2 分鐘，12000 rpm 離心 1 分鐘,，倒掉收 集管中的廢液,，將吸附柱放回收集管中。

8. 注意：吸附柱容積為 750μl,，若樣品體積大于 750μl 可分批加入,。

9. 向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12000 rpm 離心 1 分鐘,，倒掉收 集管中的廢液,，將吸附柱放回收集管中,。

10. 注意：如果純化的 DNA 用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)（例如平末端連接或直接測(cè)序），建議加入 Buffer PW 靜置 2-5 分鐘再離心,。

11. 重復(fù)步驟 7,。

12. 12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液,。

13. 注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR 等）,。

14. 將吸附柱放到一個(gè)新的 1.5 ml 離心管（自備）中,，向吸附膜中間位置懸空滴加 50μl Buffer EB，室溫放置 2 分鐘,。12000 rpm 離心 1 分鐘,，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA,。

注意：

1. 為了提高 DNA 的回收量,，可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，室溫放置 2 分鐘,，12000 rpm 離心 1 分鐘,。

2. 洗脫體積不應(yīng)小于 30μl，體積過(guò)少會(huì)影響回收效率,。

3. 回收大于 10 kb 的 DNA的 片段時(shí),，Buffer EB 應(yīng)在 57℃水浴中預(yù)熱，可增加回收效率,。

備注：

  本試劑盒也適用于 PCR 產(chǎn)物的純化回收,。在 PCR 反應(yīng)液中加入等體積的 Buffer PG，充分混勻（對(duì)于回收小 于 150bp 的小片段可將溶液的體積增加到 3 倍以提高回收率）接上述步驟 5 進(jìn)行后續(xù)操作,。

注意事項(xiàng)：

1. *使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在 Buffer PW 中加入無(wú)水乙醇,。

2. 使用前請(qǐng)檢查 Buffer PG，如果出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀,，可在 37℃水浴中放置 3-5 分鐘,，即可恢復(fù)澄清。

3. 電泳時(shí)建議使用新的電泳緩沖液,，避免影響電泳和回收效果,；如下一步實(shí)驗(yàn)要求較高，請(qǐng)盡量使用 TAE 電 泳緩沖液,。

4. 切膠時(shí),，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對(duì) DNA 造成損傷,。

5. 回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關(guān),，初始量越少,，洗脫體積越少，回收率越低,。

6. 將水浴鍋預(yù)熱至 57℃,。

7. 所有離心步驟均可室溫下進(jìn)行。