溶酶體β-半乳糖苷酶染色試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1802

產(chǎn)品規(guī)格：100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

溶酶體β-半乳糖苷酶染色試劑盒(Lysosomal β-Galactosidase Staining Kit)是一種對(duì)溶酶體中酸性β-半乳糖苷酶(Acid β-Galactosidase)進(jìn)行染色檢測(cè)的試劑盒,，常用作細(xì)胞衰老檢測(cè)時(shí)的對(duì)照。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測(cè)到細(xì)胞或組織中溶酶體酸性β-半乳糖苷酶的活力水平情況,。本試劑盒可以用于培養(yǎng)細(xì)胞的檢測(cè),，也可以用于組織切片的檢測(cè)。絕大多數(shù)正常細(xì)胞都可以檢測(cè)到較高水平的溶酶體β-半乳糖苷酶活性水平,?？梢杂米骷?xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色時(shí)的參考染色,。細(xì)胞衰老特異的β-半乳糖苷酶僅在衰老時(shí)表達(dá),，而溶酶體β-半乳糖苷酶幾乎在任何情況下都表達(dá)。

尚寶生物生產(chǎn)的溶酶體β-半乳糖苷酶染色試劑盒,，以X-Gal為底物,，在溶酶體酸性β-半乳糖苷酶的催化下會(huì)生成深藍(lán)色產(chǎn)物。從而在光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍(lán)色的表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞或組織,。本產(chǎn)品染色后的HeLa細(xì)胞請(qǐng)參考圖1,。

圖1. HeLa細(xì)胞使用本產(chǎn)品染色后的示例圖片。

本試劑盒僅染色溶酶體酸性β-半乳糖苷酶,，不會(huì)染色衰老特異性的β-半乳糖苷酶,，也不會(huì)染色外源轉(zhuǎn)染表達(dá)的用于報(bào)告基因的β-半乳糖苷酶(大腸桿菌的β-半乳糖苷酶)。

主要特點(diǎn)：本試劑盒經(jīng)過多方面的優(yōu)化,，能兼容普通的細(xì)胞培養(yǎng)用多孔板,、移液管等聚苯乙烯類材質(zhì)耗材或容器的試劑盒。本試劑盒可以有效避免由于和多孔板,、移液管等的不兼容導(dǎo)致的染色偏弱,、染色效果不穩(wěn)定等情況。通常同類試劑盒要求使用可高溫高壓滅菌的聚丙烯(polypropylene)材質(zhì)的耗材,、容器或玻璃容器進(jìn)行溶液的配制,，而不能使用普通的多孔板、移液管等聚苯乙烯(polystyrene)類材質(zhì)的容器或耗材,，否則可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,，影響實(shí)驗(yàn)觀察,。即使嚴(yán)格按照要求操作，也會(huì)在染色時(shí)間比較長(zhǎng)的情況下,，容易出現(xiàn)絮狀物沉淀(參考圖2),。本試劑盒經(jīng)過多方面的優(yōu)化，對(duì)耗材或容器的材質(zhì)無特殊要求,，可以兼容普通的多孔板和移液管等常用耗材和容器,。而且配制的工作液不會(huì)產(chǎn)生沉淀或不溶物，使用更加便捷,。

國(guó)際同類試劑盒  尚寶生物試劑盒

圖2. 本試劑盒優(yōu)化前后的對(duì)比圖,。優(yōu)化前，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質(zhì)的材料如移液管,、多孔板等會(huì)產(chǎn)生明顯的腐蝕(A圖),，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察有異常的絮狀不溶物(C圖),；優(yōu)化后,，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質(zhì)的材料觀察不到有任何異常情況(B圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后,，在顯微鏡下觀察也沒有任何異常情況(D圖),。

如果使用6孔板檢測(cè)，足夠測(cè)定100個(gè)樣品,；使用24孔板測(cè)定,，足夠測(cè)定400個(gè)樣品；使用96孔板測(cè)定,，足夠測(cè)定1000個(gè)樣品,。對(duì)于組織切片或組織塊，可以檢測(cè)的樣品數(shù)量視樣品的大小而定,。對(duì)于普通切片的滴染足夠檢測(cè)100個(gè)樣品,。

產(chǎn)品組成：

使用說明：

1. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：

a. 對(duì)于6孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞，吸除細(xì)胞培養(yǎng)液,，用PBS或HBSS洗滌1次,，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘,。對(duì)于其它類型的培養(yǎng)板,，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進(jìn)行操作。

b. 吸除細(xì)胞固定液,，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞3次,，每次3分鐘。

c. 吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液,。染色工作液的配制方法參考表1,。
表1. 染色工作液的配制方法。

d. 37℃孵育過夜,，可以用parafilm或保鮮膜封住6孔板防止蒸發(fā),。

e. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù),，可以去除染色工作液,，加入2毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天,；或者加上封片液封片后,，4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間。

2. 對(duì)于懸浮細(xì)胞：

a. 離心收集細(xì)胞至1.5ml離心管內(nèi),，用PBS或HBSS洗滌1次,，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘,。固定時(shí)可以在搖床上緩慢搖動(dòng),，以避免細(xì)胞結(jié)成團(tuán)塊。

b. 離心,，吸除細(xì)胞固定液,，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3分鐘,。

c. 離心,，吸除PBS或HBSS,，每管加入0.5-1毫升染色工作液,。染色工作液的配制方法參考表1。

d. 37℃孵育過夜,。

e. 取部分染色后的細(xì)胞,，滴加到載玻片上或6孔板內(nèi)，普通光學(xué)顯微鏡下觀察,。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù),，可以離心，去除染色工作液,，然后加入1毫升PBS,，4℃可以保存數(shù)天。如果離心,，取細(xì)胞用于涂片,，加上封片液封片后，4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間。

3. 對(duì)于組織切片：

a. 對(duì)于石蠟切片先按照常規(guī)方法進(jìn)行脫蠟和水化處理,。對(duì)于冷凍切片直接按照以下步驟進(jìn)行,。

b. 加入適當(dāng)體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜,，室溫固定不少于15分鐘,。

c. 用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5分鐘,。

d. 吸除PBS,，加入適當(dāng)量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1,。

e. 37℃孵育過夜,，可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發(fā)。最好把整個(gè)切片浸泡在染色工作液中,。

f. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察,。如不能及時(shí)觀察，加上封片液封片后4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間,。

注意事項(xiàng)：

1. β-半乳糖苷酶染色固定液對(duì)人體有毒,、有腐蝕性，操作時(shí)請(qǐng)?zhí)貏e小心,，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。

2. X-Gal溶液在-20oC或4oC保存會(huì)凍結(jié)，室溫或37oC水浴2-5分鐘并適當(dāng)搖動(dòng)即可*融解,。

3. β-半乳糖苷酶染色液B在剛剛?cè)芙夂髸?huì)觀察到有沉淀,，屬正常現(xiàn)象,，充分混勻或Vortex后,，沉淀會(huì)全部溶解。作為常規(guī),，試劑使用前必須確保沉淀全部溶解,，并且混勻。

4. 使用96孔板等多孔板進(jìn)行檢測(cè)時(shí),，如果孵育過夜容易產(chǎn)生所謂的“邊緣效應(yīng)"(edge effect),，即多孔板四周的孔由于和外界最直接接觸，易受外界環(huán)境影響,，其中明顯的是四周細(xì)胞培養(yǎng)孔的蒸發(fā)效應(yīng),。邊緣效應(yīng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)不均勻、細(xì)胞分布不均一,、培養(yǎng)液體積不一致,、培養(yǎng)液中相關(guān)成分的濃度,、pH值不一致。建議采取以下方法避免96孔板等多孔板的邊緣效應(yīng)：避免孵育過長(zhǎng)時(shí)間,，以避免蒸發(fā)等帶來的邊緣效應(yīng),；棄用邊緣孔并在棄用的邊緣孔中加入等量的水、PBS或其他適當(dāng)溶液,；在多孔板非孔的凹陷處加入適量的水或其他適當(dāng)溶液,；將整塊板放在濕盒中；使用防揮發(fā)蓋,；在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí),，實(shí)驗(yàn)樣品最好進(jìn)行隨機(jī)分配，不要將某一組樣品固定放在某個(gè)位置而引入可能的系統(tǒng)性誤差,。

5. 需自備PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution),。

6. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品,，不得存放于普通住宅內(nèi)。

7. 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

保存條件：-20oC保存，一年有效,。其中X-Gal溶液需避光保存,。