組織細(xì)胞RNA提取試劑盒（Trizol提取法）

產(chǎn)品貨號：11131

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

RNA的種類來源比較多,，提取制備的方法各異，一般有苯酚法,、去污劑法和鹽酸胍法,，其中常用的是苯酚法,，即Trizol法提取RNA。 Trizol含苯酚和異硫氰酸胍等物質(zhì),，能迅速裂解細(xì)胞或組織并且滅活核酸酶,，保持RNA的完整性。加入氯仿并離心后,，溶液形成上層為水相(無色)、中間層,、下層為有機相(紅色),。上層用異丙醇沉淀回收總RNA，中間層用乙醇沉淀回收DNA,，下層用異丙醇沉淀回收蛋白,。組織細(xì)胞RNA提取試劑盒(Trizol提取法)適用于從各種組織或細(xì)胞中快速分離總RNA，既可用于小量樣品(50～100mg組織,、5×106細(xì)胞),，也可用于大量樣品(>1g組織/>107細(xì)胞)。提取的總RNA質(zhì)量高,，可用于Northern blot,、Dot blot、polyA篩選,、體外翻譯,、RNase保護分析和分子克隆。本產(chǎn)品具有以下特點：①適用范圍廣,；②操作簡單,，整個過程1小時內(nèi)完成；③純度高,；④污染少,。

產(chǎn)品組成：

        試劑(F): RNA 保存液              10ml               20ml        4℃,，避光

自備材料：

1. 液氮\研缽或勻漿器

2. 經(jīng) RNase free 處理的移液器吸頭,、EP 管等耗材

3. 低溫高速離心機、低溫冰箱

操作步驟(僅供參考)：

1. 樣品準(zhǔn)備

   ⑴ 貼壁細(xì)胞：①直接裂解：直接在培養(yǎng)瓶/皿中加入 Trizol 裂解細(xì)胞,，每 10cm2面積加 1ml,，用移液器吹打混勻。②胰蛋白酶消化：用無菌 PBS 洗滌細(xì)胞后,，加入含有 0.05～0.25%胰蛋白酶的 PBS 處理細(xì)胞,，當(dāng)細(xì)胞脫離容器壁后，加入含有血清的培養(yǎng)基終止反應(yīng),，將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至無 RNase 的離心管中,，以下參考懸浮細(xì)胞相關(guān)操作步驟,。

   ⑵ 懸浮細(xì)胞：無需清洗細(xì)胞，直接 5000～6000g 離心 5min,，收集細(xì)胞沉淀,，去除上清。收集細(xì)胞時一定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈,，否則裂解不*,，降低 RNA 收獲率。每 5×106～107,，動物,、植物和酵母細(xì)胞或每 10 細(xì)菌細(xì)胞加入 1ml Trizol，充分振蕩混勻,。

   ⑶ 組織：取新鮮動物或者植物組織或者-70℃凍存組織,，50～100mg 組織在液氮中充分研磨或者加入 1ml Trizol研磨或者用勻漿器勻漿處理。樣品體積一般不超過 Trizol 體積的 10 %,。研磨要迅速,，以 1min 為佳。⑷ 血液：取 0.5～1 ml 新鮮或凍存的血液,，12000g 離心 5 min,，去除血漿，加入 1 ml Trizol,，充分振蕩混勻,。
   

2. 核酸分離：充分振蕩混勻(可以置于低溫/超低溫冰箱凍存 5～10 min 后，充分振蕩,，反復(fù) 1～3 次),。將裂解樣品或勻漿液室溫靜置 5～10min，使核蛋白與核酸*分離,。

3. 樣品分層：加入 0.2 ml RNA 分離液,，振蕩 15 s，室溫靜置 2～3min,。12000 g 4℃離心 10～15 min,。上層為水相，中間層和下層為有機相,，RNA 在上層水相,。4. 沉淀 RNA：吸取上層水相(約 500μl)轉(zhuǎn)移至無 RNase

4. 沉淀 RNA：吸取上層水相(約 500μl)轉(zhuǎn)移至無 RNase 的離心管中(不要吸取任何中間層物質(zhì),否則會有染色體DNA 污染)，加入等體積 RNA 沉淀液混勻,，室溫放置 15～20min,。12000 g 4℃離心 10min，離心后管側(cè)或管底形成膠狀沉淀,，棄上清,。

5. 洗滌 RNA：加入 1ml RNA 洗滌液輕輕洗滌沉淀,，室溫放置 5～10min，7500g 4℃離心 5min,，棄上清,。室溫干燥 5～10min，不宜過分干燥,，否則 RNA 難以溶解,。

6. 溶解 RNA：加入 30～50ul RNase-free dd H 2 O 充分溶解，-70℃長期保存或直接用于后續(xù)試驗,。對于肝,、胰腺、腎等組織中 RNase 含量高的樣品沉淀用 RNA 保存液溶解,。

注意事項：

1. 樣品保存：加入 Trizol 混勻后,，樣品可在-70℃放置 1～2 月,；RNA 樣品可以在 70%酒精中-70℃保存 2～4周：如果需要長期保存,，應(yīng)置于超低溫冰箱中保存

2. Trizol Reagent 和 RNA 分離液含有腐蝕性物質(zhì)，污染皮膚或眼睛后,，立即用清水或生理鹽水沖洗,，必要時尋求醫(yī)生的幫助。

3. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

有效期：12個月有效。