哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒 核酸類

產(chǎn)品貨號：11065

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒 核酸類用分子生物學技術研究復雜的基因組,，首先要求制備純凈的高分子質量DNA,，一般分為兩個步驟，先裂解細胞,、溶解DNA,，接著采用酶學或化學方法去除蛋白、RNA以及其他大分子,。尚寶生物 哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用經(jīng)典的蛋白酶K處理法,，可以抽提到100～150kb以上的基因組DNA，提取的基因組DNA可用于Southern雜交,、基因組DNA的PCR擴增及基因組DNA文庫的構建等,。該試劑盒的提取效率大致為,，從1g組織可以提取到約150～200μg 100kb以上的基因組DNA，從10 ～10 Hela細胞可以提取到約5～50μg 100kb以上的基因組DNA,。該試劑盒僅用于科研領域,，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 組織或培養(yǎng)細胞

2. PBS 

3. 無水乙醇,、70%乙醇 

4. 25:24:1 酚/氯仿/異戊醇

操作步驟(僅供參考)：

1. 準備樣品：

 ①組織樣本：切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結,。將 100mg～1g 凍結的組織用預冷的研缽和研杵研碎或用錘子將其搗成碎末,。培養(yǎng)細胞：收集貼壁生長或懸浮生長細胞培養(yǎng)液，貼壁生長細胞需先用胰蛋白酶消化液消化,，再用 PBS 清洗一次,。4℃離心機，1000～2000g 離心 1～2min,，棄上清,。用 1～10ml 預冷的 PBS 再次懸浮離心，如此 2 次洗滌,。

2. 每 1ml 樣品裂解液加入 5μl 的蛋白酶 K 溶液,，混勻。每 50mg 組織或 5×107 細胞用 0.5～0.6ml 樣品裂解液懸浮,，懸浮應*,，不應留下結塊。

3. 充分混勻,，50℃振蕩下溫育 12～18h 或過夜,。

4. 加入等體積 25:24:1 酚/氯仿/異戊醇，輕輕混合,，盡可能減少對 DNA 的剪切,。

5. 吸出酚相及中間相(可以吸除少量靠近中間相的水相液體)，剩余的水相用等體積酚/氯仿/異戊醇再抽提一次,。重復該步驟 1 次,。 

6. 吸取上層液(水溶液)250～300μl 至新 EP 管中，加入等體積無水乙醇和 1/4 體積的乙酸銨溶液,，顛倒混勻數(shù)次,。 

7. 4℃ 10000g 1min，棄上清,。

8. 加入 70%乙醇,，4℃ 10000g 1min，棄上清,。重復該步驟一次,。

9. 盡量吸除殘余的乙醇,，空氣干燥，等到不到明顯液體時,，立即加入 50～100μl Nuclease Free Water 溶解 DNA,，4℃或-20℃保存。

注意：不可過分干燥基因組 DNA 沉淀,，否則會極難溶解,。如果發(fā)現(xiàn) DNA 沉淀難以溶解，可以在 4℃用搖床緩慢搖動過夜,，以溶解 DNA 沉淀,。 

10. A 260 /A 280 處檢測 DNA 純度，高純度的 DNA 一般 A 260 /A 280＞1.8,。

注意事項：

1. 如果打算提取大片段的基因組 DNA,，應盡量避免基因組 DNA 的物理性剪切。例如避免劇烈振蕩含有基因組DNA 的樣品,，可以用剪掉槍頭尖的槍頭吸取基因組 DNA 的樣品,。 

2. 準備細胞樣品時，如果細胞量過少(＜3×107 ),，應 0.3ml 含蛋白酶 K 的樣品裂解液,。

3. 為避免高分子質量 DNA 被剪切，可以不采用乙醇沉淀 DNA,，可用透析袋替代乙醇：在 100 倍體積的 TE buffer中至少透析 2 次,，所用取全部時間應＞24h。 

4. 不可過分干燥基因組 DNA 沉淀,，否則會極難溶解,。5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

有效期： 6個月有效。

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