谷氨酸(Glu)含量檢測(cè)試劑盒（微量法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1126

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Glu廣泛存在于動(dòng)物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸之一,，而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成,，是生物體內(nèi)主要氨基來(lái)源之一。此外,，Glu還是味精的主要有效成分,，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。

谷氨酸脫氫酶（GDH）催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸,、NADH和NH4⁺,，引起340nm處吸光度的上升，通過測(cè)定340nm吸光度的變化,，計(jì)算谷氨酸含量,。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè),。

產(chǎn)品內(nèi)容：

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前加入20mL試劑一,；

2. 試劑四：臨用前加入1.5mL試劑二；

3. 標(biāo)準(zhǔn)液：10μmol/mL谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品,。

技術(shù)指標(biāo)：

檢出限：0.0037μmol/mL

線性范圍：0.0125-0.2μmol/mL

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔UV板,、研缽、冰,、蒸餾水,。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

細(xì)菌,、細(xì)胞或組織樣品：收集細(xì)胞或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次），10000rpm,，常溫離心10min,，取上清待測(cè)。

稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿,，10000rpm,，常溫離心10min，取上清待測(cè),。

二,、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 ：將標(biāo)準(zhǔn)品分別稀釋為0.2,、0.1,、0.05、0.025,、0.0125μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,。

3. 在有蓋EP管中加入下列試劑：

（1）標(biāo)準(zhǔn)管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL標(biāo)準(zhǔn)溶液、160μL試劑三和10μL試劑四混勻,，立即記錄 340nm處20s時(shí)的吸光值為A1和5min20s時(shí)的吸光值A2,，計(jì)算?A=A2-A1。

（2）測(cè)定管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL樣本,、160μL試劑三和10μL試劑四混勻,，立即記錄340nm 處20s時(shí)的吸光值為A1和5min20s時(shí)的吸光值A2，計(jì)算?A=A2-A1,。

三,、谷氨酸含量計(jì)算：

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以谷氨酸含量（µmol/mL）為x軸，標(biāo)準(zhǔn)管?A為y軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線y=kx+b,。將測(cè)定管?A帶入方程得到x值（µmol/mL）。

2. 氨基酸含量計(jì)算：

（1）按照蛋白濃度計(jì)算：谷氨酸含量（µmol/mg）=x×V樣本÷（Cpr×V樣本）=x÷Cpr

（2）按照樣品鮮重計(jì)算：谷氨酸含量（µmol/g 質(zhì)量）=x×V樣本÷（W÷V樣總×V樣本）=x÷W

（3）按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：谷氨酸含量（μmol/10⁴ cell）＝x×V樣本÷（1000÷V樣總×V樣本）=0.001x,。

V樣總：加入提取液體積,，1mL；V樣本：加入的樣本體積,，0.04mL,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本鮮重,，g；1000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，1000萬(wàn),。 

注意事項(xiàng)：

如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定,。

谷氨酸(Glu)含量檢測(cè)試劑盒（微量法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1126

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Glu廣泛存在于動(dòng)物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸之一,，而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成,，是生物體內(nèi)主要氨基來(lái)源之一。此外,，Glu還是味精的主要有效成分,，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。

谷氨酸脫氫酶（GDH）催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸,、NADH和NH4⁺,，引起340nm處吸光度的上升，通過測(cè)定340nm吸光度的變化,，計(jì)算谷氨酸含量,。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè),。

產(chǎn)品內(nèi)容：

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前加入20mL試劑一,；

2. 試劑四：臨用前加入1.5mL試劑二；

3. 標(biāo)準(zhǔn)液：10μmol/mL谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品,。

技術(shù)指標(biāo)：

檢出限：0.0037μmol/mL

線性范圍：0.0125-0.2μmol/mL

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔UV板,、研缽、冰,、蒸餾水,。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

細(xì)菌,、細(xì)胞或組織樣品：收集細(xì)胞或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次），10000rpm,，常溫離心10min,，取上清待測(cè)。

稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿,，10000rpm,，常溫離心10min，取上清待測(cè),。

二,、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 ：將標(biāo)準(zhǔn)品分別稀釋為0.2、0.1,、0.05,、0.025、0.0125μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,。

3. 在有蓋EP管中加入下列試劑：

（1）標(biāo)準(zhǔn)管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL標(biāo)準(zhǔn)溶液、160μL試劑三和10μL試劑四混勻,，立即記錄 340nm處20s時(shí)的吸光值為A1和5min20s時(shí)的吸光值A2,，計(jì)算?A=A2-A1。

（2）測(cè)定管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL樣本,、160μL試劑三和10μL試劑四混勻,，立即記錄340nm 處20s時(shí)的吸光值為A1和5min20s時(shí)的吸光值A2，計(jì)算?A=A2-A1,。

三,、谷氨酸含量計(jì)算：

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以谷氨酸含量（µmol/mL）為x軸，標(biāo)準(zhǔn)管?A為y軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線y=kx+b,。將測(cè)定管?A帶入方程得到x值（µmol/mL）。

2. 氨基酸含量計(jì)算：

（1）按照蛋白濃度計(jì)算：谷氨酸含量（µmol/mg）=x×V樣本÷（Cpr×V樣本）=x÷Cpr

（2）按照樣品鮮重計(jì)算：谷氨酸含量（µmol/g 質(zhì)量）=x×V樣本÷（W÷V樣總×V樣本）=x÷W

（3）按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：谷氨酸含量（μmol/10⁴ cell）＝x×V樣本÷（1000÷V樣總×V樣本）=0.001x,。

V樣總：加入提取液體積,，1mL；V樣本：加入的樣本體積,，0.04mL,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本鮮重,，g；1000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，1000萬(wàn),。 

注意事項(xiàng)：

如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定,。