非蛋白質(zhì)巰基含量檢測(cè)試劑盒（微量法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1096

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基,。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能,，對(duì)生物體的自 我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。

巰基基團(tuán)與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng),，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。

技術(shù)指標(biāo)： 

檢出限：0.0061 μmol/mL

線性范圍：0.00625-0.8 μmol/mL

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

產(chǎn)品內(nèi)容：

溶液的配制：

1. 提取液的配制：將提取液一和提取液二按體積比1：1的比例混合配制,，按照樣本數(shù)量配制并在當(dāng)天用完,；

2. 試劑二：臨用前加入2mL無水甲醇充分溶解備用；

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg半胱氨酸,，臨用前加入1.65mL提取液溶解為50µmol/mL的半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、離心機(jī),、恒溫水浴鍋,、微量玻璃比色皿/96孔板、甲醇,、研缽/勻漿器和蒸餾水,。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,，具體比例可以參考文獻(xiàn)） 

1. 動(dòng)物,、植物組織：稱取約0.1g，加入1mL的提取液,，制備成10%的勻漿,，10000g，常溫離心10min,，取上清待測(cè),。

2. 細(xì)胞或細(xì)菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)胞（功率300w,，超聲3秒,，間隔7秒，總時(shí)間3min）然后10000g,，常溫離心10min,，取上清置冰上待測(cè)。

3. 血清（漿）,，培養(yǎng)液：向0.1mL血清（漿）或培養(yǎng)液中加入1mL提取液,，10000g，常溫離心10min,，取上清待測(cè),。

二、測(cè)定步驟 

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品的制備：將50μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液用提取液稀釋至0.4、0.2,、0.1,、0.05、0.025,、0.0125,、0.00625μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

3. 操作表

二、計(jì)算公式

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為x軸,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b,，將ΔA測(cè)定代入公式得到x（μmol/mL）,。

2. 非蛋白質(zhì)巰基含量計(jì)算：

（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算

非蛋白質(zhì)巰基含量（µmol/g 質(zhì)量）=x×V提取÷W=x÷W

（2）按血清、培養(yǎng)液體積計(jì)算

非蛋白質(zhì)巰基含量（µmol/mL）=x×（V提取+V液體）÷V液體=11×x

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

非蛋白質(zhì)巰基含量（μmol/10⁴cell）=x×V提取÷500=0.002×x

V提?。杭尤胩崛∫后w積,，1mL；W：樣本質(zhì)量,，g,；Cpr，樣本蛋白濃度,，mg/mL,；500：500萬個(gè)細(xì)胞；V液體：血清（漿）或培養(yǎng)液體積,，0.1mL,。

注意事項(xiàng)： 

1. 如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定,。

非蛋白質(zhì)巰基含量檢測(cè)試劑盒（微量法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1096

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基,。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能,，對(duì)生物體的自 我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。

巰基基團(tuán)與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng),，生成黃色化合物,，在412nm處有最大吸收峰。

技術(shù)指標(biāo)： 

檢出限：0.0061 μmol/mL

線性范圍：0.00625-0.8 μmol/mL

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè),。

產(chǎn)品內(nèi)容：

溶液的配制：

1. 提取液的配制：將提取液一和提取液二按體積比1：1的比例混合配制，按照樣本數(shù)量配制并在當(dāng)天用完,；

2. 試劑二：臨用前加入2mL無水甲醇充分溶解備用,；

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg半胱氨酸，臨用前加入1.65mL提取液溶解為50µmol/mL的半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、離心機(jī)、恒溫水浴鍋,、微量玻璃比色皿/96孔板,、甲醇、研缽/勻漿器和蒸餾水,。

操作步驟：

一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)） 

1. 動(dòng)物,、植物組織：稱取約0.1g,，加入1mL的提取液，制備成10%的勻漿,，10000g,，常溫離心10min，取上清待測(cè),。

2. 細(xì)胞或細(xì)菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液）,，超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒,，間隔7秒,，總時(shí)間3min）然后10000g，常溫離心10min,，取上清置冰上待測(cè),。

3. 血清（漿），培養(yǎng)液：向0.1mL血清（漿）或培養(yǎng)液中加入1mL提取液,，10000g,，常溫離心10min，取上清待測(cè),。

二,、測(cè)定步驟 

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品的制備：將50μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液用提取液稀釋至0.4,、0.2、0.1,、0.05,、0.025、0.0125,、0.00625μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

3. 操作表

二,、計(jì)算公式

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為x軸，ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將ΔA測(cè)定代入公式得到x（μmol/mL）,。

2. 非蛋白質(zhì)巰基含量計(jì)算：

（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算

非蛋白質(zhì)巰基含量（µmol/g 質(zhì)量）=x×V提取÷W=x÷W

（2）按血清,、培養(yǎng)液體積計(jì)算

非蛋白質(zhì)巰基含量（µmol/mL）=x×（V提取+V液體）÷V液體=11×x

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

非蛋白質(zhì)巰基含量（μmol/10⁴cell）=x×V提取÷500=0.002×x

V提取：加入提取液體積,，1mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；Cpr,，樣本蛋白濃度，mg/mL,；500：500萬個(gè)細(xì)胞,；V液體：血清（漿）或培養(yǎng)液體積，0.1mL,。

注意事項(xiàng)： 

1. 如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值,，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定,。