β-木糖苷酶活性檢測試劑盒（微量法）

產(chǎn)品貨號：BA1028

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

產(chǎn)品內(nèi)容：

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入1mL蒸餾水。

2. 標準品：5μmol/mL對硝基苯酚溶液,。

產(chǎn)品說明：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物,、細菌和真菌等生物體,，是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵,。另外,，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,，具有廣泛的應(yīng)用價值,。

β-木糖苷酶催化對硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基苯酚，對硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰， 測定405nm光吸收增加速率,，可計算β-木糖苷酶活性,。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測,。

需自備的儀器和用品：

天平,、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀,、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器,、水浴鍋,、蒸餾水。

操作步驟：

一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻）

1. 植物樣本：稱取約0.1g樣品，加1.0 mL提取液充分冰浴勻漿,，然后12000rpm,，4℃，離心20min,，棄沉淀,，取20μL上清測定蛋白含量，剩余上清作為待測酶液,。

2. 細菌,、真菌樣本：收集約500萬個細胞，加入1.0 mL提取液,，超聲波破碎（冰浴,，功率300w，超聲3秒,，間隔7秒,，總時間3min）；然后10000rpm,，4℃,，離心10min，棄沉淀 ,，取20μL上清測定蛋白含量,，剩余上清置于冰上待測。

二,、測定操作表 

1. 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至405nm，對照管調(diào)零。

2. 標準液的處理：用試劑二將標準液稀釋至0.2,、0.1,、0.05、0.025,、0.0125,、0.00625μmol/mL。

3. 樣本測定： 

三、β-木糖苷酶活性計算 

根據(jù)標準管的吸光度ΔA標準（x）和濃度（y,，μmol/mL）建立標準曲線,，將ΔA測定帶入標準曲線中，計算樣本生成的產(chǎn)物量y（μmol/mL）,。

1. 按樣本蛋白含量計算：

酶活定義：45℃,，pH7.4時，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)催化產(chǎn)生1μmol對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位,。

β-木糖苷酶活性（U/ mg prot）=(y×V樣)÷(V樣×Cpr)÷T=0.05×y÷Cpr

2. 按樣本質(zhì)量計算：

酶活定義：45℃,，pH7.4時，每克樣本1min內(nèi)催化產(chǎn)生1μmol對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位,。

β-木糖苷酶活性（U/g 質(zhì)量）＝(y×V樣)÷(W×V樣÷V樣總)÷T=0.05×y÷W

3. 按細胞數(shù)量計算：

酶活定義：45℃,，pH7.4時，每10⁴個細胞1min內(nèi)催化產(chǎn)生1μmol對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位,。

β-木糖苷酶活性（U /10⁴cell）= (y×V樣)÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.0001×y

Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；0.2mL,；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.04mL；V樣總：加入提取液體積,，1mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；500：細胞或細菌總數(shù),，500萬,；T：反應(yīng)時間，20min,。

注意事項：

1. 吸光度變化應(yīng)該控制在0.05-0.6之間,。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變,。

2. 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定,，可選用考馬斯亮藍法蛋白含量測定試劑盒進行測定。