Trizol(總RNA提取試劑)

產(chǎn)品貨號：T11180

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

產(chǎn)品簡介：

Trizol是一種新型的用于細胞或組織的總RNA提取試劑,，Trizol采用與Invitrogen TRIzol相似的原理和方法，其顏色,、抽提的方法和步驟與后者相同,。Trizol含酚和異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速裂解細胞或組織并且滅活核酸酶,，保持RNA的完整性,。加入氯仿并離心后，溶液形成上清層為水相(無色),、中間層,、下層為有機相(紅色)。上清層用異丙醇沉淀回收總RNA，中間層用乙醇沉淀回收DNA,，下層用異丙醇沉淀回收蛋白,。

Trizol適用于從各種組織或細胞中快速分離總RNA，既可用于小量樣品(50～100mg組織,、5×10⁶細胞),，也可用于大量樣品(>1g組織/>10⁷細胞)。提取的總RNA質(zhì)量高,，可用于Northern blot,、Dot blot、polyA篩選,、體外翻譯,、RNase保護分析和分子克隆。本產(chǎn)品具有以下特點：①適用范圍廣,；②操作簡單,，整個過程1小時內(nèi)完成；③純度高,；④污染少,。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 試劑：無水乙醇,、氯仿,、異丙醇、DEPC處理水等,。

2. 耗材： RNase廣泛存在于人的皮膚上和體液及環(huán)境中,，RNase是導致RNA降解的最主要物質(zhì)，非常穩(wěn)定,。操作時應(yīng)佩戴一次性口罩,、手套、帽子,。塑料制品,、玻璃和金屬物品、實驗儀器等應(yīng)清除RNase,，移液器吸頭,、EP管等制品的RNase free處理尤為重要。

3. 儀器：低溫高速離心機,、低溫冰箱。

操作步驟 (僅供參考) ：

1. 樣品準備

（1）貼壁細胞：

①直接裂解：直接在培養(yǎng)瓶/皿中加入Trizol裂解細胞,，每10cm²面積加1ml Trizol,，用移液器吹打混勻。

②胰蛋白酶消化：用無菌PBS洗滌細胞后，加入含有0.05～0.25%胰蛋白酶的PBS處理細胞,，當細胞脫離容器壁后,，加入含有血清的培養(yǎng)基終止反應(yīng)，將細胞溶液轉(zhuǎn)移至無RNase的離心管中,，5000～6000g離心5min,，收集細胞沉淀，去除上清,。收集細胞時一定要將細胞培養(yǎng)液去除干凈,，否則裂解不，降低RNA收獲率,。  

（2）懸浮細胞：無需清洗細胞,，直接5000～6000 g離心5min，收集細胞,。每5×10⁶～10⁷動物,、植物和酵母細胞或每10⁷細菌細胞加入1ml Trizol。

（3）組織：取新鮮動物或者植物組織或者-70℃凍存組織,，50～100mg組織在液氮中充分研磨或者加入1ml Trizol研磨或者用勻漿器勻漿處理,。樣品體積一般不超過Trizol體積的10%。研磨要迅速,，以1min為佳,。

（4）血液：取0.5～1 ml新鮮或凍存的血液，12000g離心5min,，去除血漿,，加入1ml Trizol，充分振蕩混勻,。

2. 核酸分離：充分振蕩混勻(可以置于低溫/超低溫冰箱凍存5～10min后,，充分振蕩，反復1～3次),，將裂解樣品或勻漿液室溫放置5～10min,，使核蛋白與核酸分離。

3. 樣品分層：加入0.2ml氯仿/1ml Trizol,，劇烈振蕩15s,，室溫放置2～3min。置于4℃離心機,，12000g離心10～15 min,。上層為水相，中間層和下層為有機相,，RNA在上層水相,。

4. 沉淀RNA：吸取上層水相(約500μl)轉(zhuǎn)移至無RNase的離心管中(不要吸取任何中間層物質(zhì),否則會有染色體DNA污染),，加入等體積異丙醇混勻(或者加入1.2倍體積Trizol專用RNA沉淀液，超低溫冰箱放置2～3hr,可以大大提高RNA回收率）,，室溫放置15～20 min,。12000 g 4℃離心10min，離心后管側(cè)或管底形成膠狀沉淀,，棄上清,。

5. 洗滌RNA：加入1ml DEPC水配制的75%乙醇/1ml Trizol洗滌沉淀(或者加入1ml Trizol專用RNA洗滌液，可以大大提高RNA純度）,，室溫放置5～10 min,，7500g 4℃離心5min，棄上清,。室溫干燥5～10 min,，不宜過分干燥，否則RNA難以溶解,。

6. 溶解RNA：加入30～50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA,，-70℃長期保存或直接用于后續(xù)試驗。對于肝,、胰腺,、腎等組織中RNase含量高的樣品，沉淀時用100%去離子甲酰胺溶解,。

分析與定量：

1. 測定樣品在260nm和280nm的吸收值確定RNA的質(zhì)量,。按1OD=40pg RNA計算RNA的產(chǎn)率。OD260/280在1.8～2.0視為抽提RNA純度較好,。濃度在4μg/ml以上的樣品適于用分光光度計測定,。

2. 進行甲醛變性瓊脂糖電泳，確定RNA的完整性和污染情況,。

3. 核酸分析儀測定RNA的質(zhì)量和純度,。

注意事項：

1. 樣品保存：加入Trizol混勻后，樣品可在-70℃放置1～2月,；RNA樣品可以在70%酒精中-70℃保存2～4周：如果需要長期保存,，應(yīng)置于超低溫冰箱中保存。

2. Trizol是強腐蝕性物質(zhì),，污染皮膚或眼睛后,，立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時尋求醫(yī)生的幫助,。

3. Trizol可常溫運輸,，建議保存4℃保存。

4. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

有效期：12個月有效,。

常見問題分析：