ABTS自由基清除能力檢測試劑盒（微量法）

產品貨號：BA1868

產品規(guī)格：100管/48樣

產品簡介：

ABTS法可用于親水性和親脂性物質抗氧化能力測定，是使用泛的間接檢測方法,。ABTS經氧化后生成穩(wěn)定的藍綠色陽離子ABTS自由基,，在405nm或734nm處有最大吸收峰,。被測物質加入ABTS自由基溶液后,，所含抗氧化成分能與ABTS自由基發(fā)生反應而使反應體系褪色,，405nm的吸光度下降,，在一定范圍內其吸光度的變化與自由基被清除的程度成正比,。本試劑盒中，通過測定吸光度下降的程度來反映樣本清除ABTS自由基的能力,。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

產品組成：

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入1mL蒸餾水,，充分溶解,；用不完的試劑可分裝后保存，-20℃可保存四周,，避免反復凍融,；

2. 試劑三工作液的配制：液體置于試劑瓶內EP管中。臨用前根據樣本量按試劑三（µL）：蒸餾水（mL）=1µL:12mL 的比例配成試劑三工作液,，現用現配,，用多少配多少，盡量在4h之內用完,；

3. 試劑四工作液的配制：可先將試劑四-20℃分裝保存,。臨用前根據樣本量按試劑四：試劑一（V:V）=1:9的比例配成試劑四工作液，現配現用,，現配現用,，用不完的試劑放于-20℃可保存兩周。

4. 試劑五：粉劑置于試劑瓶內玻璃瓶中,，含有5mg維生素C,。臨用前加入2.8mL提取液，充分振蕩溶解,； 配成10mmol/L維生素C溶液,，用于陽性對照,。2-8℃可保存兩周。

5. ABTS工作液的配制：臨用前根據樣本量按試劑一：試劑二：試劑三工作液（V:V:V）=76:5:4的比例配成ABTS工作液,，現用現配,，室溫避光保存，務必在30分鐘內使用,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀,、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋,、臺式離心機,、研缽/粉碎機、烘干箱,、30~50 目篩,、冰、蒸餾水,。

操作步驟：

一,、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可參考文獻）

1. 植物組織樣本的制備：將新鮮樣本置于60℃烘箱烘干至恒重,，研缽研碎（或粉碎機粉碎）,，過30~50目篩；稱取約0.05g樣本,，加入1mL提取液后置于40℃水浴鍋中浸提30min,；10000rpm室溫離心10min，取上清,，置于冰上待測,。

2. 紅酒、果汁等液體樣本：吸取100µL樣本溶液加入900µL提取液,，旋渦振蕩混勻,，室溫10000rpm離心10min，取上清,，置冰上待測,。

3. 提取物或者藥物：可用提取液配制成一定濃度，如5mg/mL,。

注意：不同樣本清除ABTS自由基的能力可能相差很大,，為保證實驗結果的準確性，樣本要根據預實驗結果進行適當調整（如清除率大于90%,，建議將提取的樣本用提取液進行稀釋,；清除率小于5%，建議加大烘干樣本質量或液體樣本體積進行提?。?。

二,、測定步驟 

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至405nm,，分光光度計用蒸餾水調零。

2. 陽性對照的準備：若需要線性關系,，建議將10mmol/L的維生素C溶液用提取液配制成1,、0.8、0.6,、0.4,、 0.2、0.1mmol/L的維生素C溶液待用,，稀釋可參考下表,；若需要清除率約為90%的陽性對照，則建議將10mmol/L維生素C溶液用提取液配制成大于1mmol/L的維生素C溶液待用,。

備注：實驗中每個標準管需10µL維生素C溶液,。

3. 操作表：在96孔板或EP管中分別加入下列試劑：

三,、ABTS自由基清除率的計算

1. 陽性對照的自由基清除率計算公式：

ABTS自由基清除率D_VC% =[(A空白-A陽性對照)÷A空白]×100%。

2. 樣本的自由基清除率計算公式：

ABTS自由基清除率D% =[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白×100%,。

注意事項： 

1. 不同樣本清除ABTS自由基的能力可能相差很大,，如果要比較不同樣本的ABTS自由基清除能力，建議對于同一批樣本加入等量的樣本,，紅酒,、組織勻漿、果汁等液體樣本加入同樣體積,，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度,。在比較時，將樣本根據預實驗結果進行適當調整,，比較同樣濃度（相同稀釋倍數）的清除率大小,。

2. 樣本建議當天提取當天檢測。

實驗實例： 

1. 取0.05g辣椒加入1mL提取液進行勻漿研磨,，離心取上清后按照測定步驟操作,，計算清除率得：

D%=[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白×100% =[1.111-(0.365-0.061)]÷1.111×100%=72.637%,。