Triton X-100細胞裂解液 

產(chǎn)品貨號：T15196

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

產(chǎn)品簡介：

Triton X-100細胞裂解液是一種經(jīng)典的快速裂解細胞組織并獲得蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于 PAGE電泳，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation,，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。Triton X-100、NaCl,、Tris-HCl 等組成，并含有多種蛋白酶抑制劑成分,，可以有效抑制蛋白的降解,，并維持原有的蛋白間相互作用。作用原理是利用去污劑Triton X-100破壞脂質(zhì)雙分子層,，溶解胞質(zhì)和細胞膜,，破壞分子間微弱結(jié)合鍵的大部分蛋白質(zhì)抗原。其濃度在0.1%～1%時即可滿足幾乎所有溶解的需求,，且可補充等離子濃度的鹽及使pH接近中性,。不宜用 Bradford法測定由Triton X-100 Lysis Buffer獲得樣本的蛋白濃度。 

產(chǎn)品組成：

試劑名稱規(guī)格保存條件

Triton X-100 Lysis Buffer100ml-20℃

PMSF(100mM)1.5ml-20℃

操作步驟(僅供參考)：

(一)貼壁培養(yǎng)細胞 

1.取Triton X-100 Lysis Buffer室溫溶解混勻,，加入PMSF,，使PMSF終濃度為1mM。 

2.去培養(yǎng)液,，用PBS,、NS或無血清培養(yǎng)液清洗1次，低速離心,，棄上清,，留取沉淀。 

3.按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Triton X-100 Lysis Buffer,。移液器輕輕吹打,，使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解,，通常裂解液作用于細胞1～3s內(nèi),，細胞就會被裂解。通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已足夠,，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200～250μl,。 

4.10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機,，室溫下離心亦可),，取上清。 

5.進行后續(xù)的SDS-PAGE,、Western,、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作,。 

(二)懸浮培養(yǎng)細胞 

1.取Triton X-100 Lysis Buffer室溫溶解混勻，加入PMSF,，使PMSF終濃度為1mM,。 

2.低速離心懸浮細胞，棄上清,，收集沉淀,。 

3.用手指輕彈細胞，使其松散,。按照6孔板每孔細胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例,，加入尚寶生物Triton X-100 Lysis Buffer。通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠,，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細胞,，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀,。 

4.10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機,，室溫下離心亦可),，取上清。 

5.進行后續(xù)的SDS-PAGE,、Western,、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 

(三)組織樣本 

1.取Triton X-100 Lysis Buffer 室溫溶解混勻后,，加入PMSF,，使PMSF終濃度為1mM。 

2.把組織剪切成細小的碎片,，越小越好,。 

3.取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織，迅速用液氮研磨,，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi),，以減少蛋白的降解。 

4.按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液,。冰上或4℃裂解15～30min,。 

5.步驟3、4亦可以采用如下過程：按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Triton X-100 Lysis Buffer,。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,，直至充分裂解，該過程盡量控制在1～2min之內(nèi),，以減少蛋白的降解,。 

6.10000～12000g,，4℃離心5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可),，取上清,。 

7.進行后續(xù)的PAGE、Western,、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作,。 

注意事項：

1.去除貼壁細胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒有干擾,，可以不用清洗,。 

2.如果裂解不充分可以適當增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品,，可以適當減少裂解液的用量,。 

3.如果細胞量較多，必需分裝成50～100萬細胞/離心管,，然后再裂解,。大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸,，相對比較容易裂解充分,。 

4.如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,，通過強烈Vortex使樣品裂解充分,。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗,。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分,。 

5.溶解Triton X-100 Lysis Buffer時,，應(yīng)盡量縮短溶解時間，避免有效成分失效,。 

6.裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物,，屬正常現(xiàn)象,。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物,。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗,。如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,，例如NF-KB,、p53等時，通常不必進行超聲處理,，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子,。 

7.細胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或4℃進行,。

有效期：12個月有效,。