細(xì)菌基因組提取試劑盒用于細(xì)菌基因組DNA的少量提取,,純化原理是利用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞,,釋放基因組DNA,。基因組DNA被硅膠膜柱可逆吸附,。通過蛋白酶消化和沖洗液去除蛋白質(zhì),、脂質(zhì)和其他雜質(zhì)后,用純化溶液洗脫獲得基因組DNA,。本品可在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(不超過106-108)μG超純基因組DNA(od260/280=1.7-1.9)從0.5-2ml菌液中提取3-20%,,可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)如酶切和PCR。
1,、高效率:一次3-20μG基因組DNA,。
2、快速:可在30分鐘內(nèi)獲得超純基因組DNA,。
3,、安全性:整個(gè)操作過程中不使用苯酚/氯仿有機(jī)物。
4,、純度高:無需進(jìn)一步純化,,可直接用于下游實(shí)驗(yàn)。
細(xì)菌基因組提取試劑盒采用可特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖系統(tǒng)提取細(xì)菌基因組DNA,。離心吸附柱所用的硅基質(zhì)材料是新型材料,,能高效、特異地吸附DNA,,去除細(xì)胞內(nèi)的雜質(zhì)蛋白質(zhì)等有機(jī)物,。提取的基因組純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠,。本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作,,包括酶切、PCR,、文庫構(gòu)建,、雜交等實(shí)驗(yàn)。
細(xì)菌基因組提取試劑盒使用注意事項(xiàng):
1,、避免重復(fù)凍融樣本,,否則提取的片段會(huì)變小,提取量會(huì)減少,。
2,、試劑盒內(nèi)溶液若有沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后使用,,不影響提取效果,。
3、如果實(shí)驗(yàn)中離心步驟中柱子堵塞,,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間,。
4,、洗脫緩沖液體積不小于50ul,體積過小會(huì)影響回收效率,;洗脫液的pH值也會(huì)影響洗脫效率,。如果需要水作為洗脫液,確保其pH值在8.0左右(水的pH值可用NaOH調(diào)節(jié)至此范圍),。如果pH值低于7.0,,洗脫效率會(huì)降低。DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,,以防止DNA降解,。
5、DNA濃度和純度的檢測(cè):獲得的基因組片段大小與樣品保存時(shí)間,、操作過程中的剪切力等因素有關(guān),。回收的片段可以通過瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè),,以確定濃度和純度,。DNA應(yīng)在od260處有一個(gè)明顯的吸收峰,od260值為1.0,,相當(dāng)于約50μG/ml雙鏈DNA,、40μG/ml單鏈DNA。od260/0d280比率應(yīng)為1.7-1.9,。如果不使用洗脫緩沖液進(jìn)行洗脫,,而是使用去離子水,比例會(huì)低,,因?yàn)閜H值和離子的存在會(huì)影響光吸收值,,但并不代表純度低。