BCA蛋白濃度測定試劑盒

產(chǎn)品貨號：34001

產(chǎn)品規(guī)格：100次/250次/500次

產(chǎn)品簡介：

BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據(jù)目前世界上常用的兩種蛋白濃度檢測方法之一BCA法研制而成,，實現(xiàn)了蛋白濃度測定的簡單,、高穩(wěn)定性,、高靈敏度和高兼容性,。靈敏度高,，檢測濃度下限達到25μg/ml,，最小檢測蛋白量達到0.5μg,，待測樣品體積為1-20μl,。在50-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

    BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響,，可以兼容樣品中高達5%的SDS,，5%的Triton X-100，5%的Tween20,、60,、80。但本試劑盒受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響,，需確保EDTA低于10mM,，無EGTA，二硫蘇糖醇(DTT)低于1mM,，β-巰基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%,。不適用BCA法時建議試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

包裝清單：

操作步驟：

1. 蛋白標準品的準備

取適量5mg/ml蛋白標準,，用PBS稀釋至終濃度為0.5mg/ml,。例如取50μl 5mg/ml蛋白標準,，加入450μl PBS即可配制成0.5mg/ml蛋白標準,。蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋,。但是為了簡便起見,，也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標準品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標準需-20oC長期保存,。

2. BCA工作液配制

根據(jù)樣品數(shù)量,，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻,。例如5ml BCA試劑A加100μlBCA試劑B,，混勻，配制成5.1ml BCA工作液,。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定,。

3. 蛋白濃度測定

a. 將標準品按0、1,、2,、4、8,、12,、16,、20μl加到96孔板的標準品孔中，加標準品稀釋液補足到20μl,，相當于標準品濃度分別為0,、0.025、0.05,、0.1,、0.2、0.3,、0.4,、0.5mg/ml。

b. 加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中,。如果樣品不足20μl,，需加標準品稀釋液補足到20μl。請注意記錄樣品體積,。

c. 各孔加入200μl BCA工作液,，37oC放置20-30分鐘。

注: 也可以室溫放置2小時,，或60oC放置30分鐘,。BCA法測定蛋白濃度時，顏色會隨著時間的延長不斷加深,。并且顯色反應(yīng)會因溫度升高而加快,。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育,，或適當延長孵育時間,。

d. 用酶標儀測定A562，或540-595nm之間的其他波長的吸光度,。

e. 根據(jù)標準曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白濃度,。

常見問題：

1. 測定標準曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。

可能的原因是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質(zhì),。

2. 是否每次測定時都需要做標準曲線,？

建議每次測定時都做標準曲線。因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深,，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān),，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標準曲線,。

注意事項：

1. 需酶標儀一臺,，測定波長為540-595nm之間，562nm最佳,。需96孔板,。如果沒有酶標儀,，也可以使用普通的分光光度計測定，但測定時,，需根據(jù)比色皿的最小檢測體積,，適當加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測體積，樣品和標準品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變,。使用分光光度計測定蛋白濃度時,，每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。?

2. 如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景,，請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒,。

3. EDTA濃度必須小于10mM，不兼容EGTA,。不適用BCA法時,，請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi),。

5. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。