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初級(jí)會(huì)員 | 第5年

400-611-0007

使用桿粒提取試劑盒時(shí)這些事情需注意了！

時(shí)間：2021/12/14閱讀：656
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　　桿粒提取試劑盒使用時(shí)不純化的桿粒DNA存在-20℃,，因?yàn)榉磸?fù)凍融會(huì)剪切DNA,。分析重組桿粒DNA（PCR鑒定重組桿粒DNA）或轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞。它適用于大量從DH10Bac轉(zhuǎn)化株提取重組桿粒pFastBac,。純化后的桿粒DNA使用PCR檢驗(yàn)或者進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。
 

桿粒提取試劑盒

 

　　桿粒提取試劑盒操作步驟：
　　1,、5ml離心管12000rpm離心1min收集細(xì)胞。
　　2,、真空吸干上清,，0.3ml的Solution1重懸沉淀，輕輕地震蕩或上下混勻,。
　　3,、0.3ml的Solution2輕輕混勻，室溫孵育5min,。注意：懸浮的沉淀應(yīng)該從渾濁到幾乎半透明,。
　　4、緩慢加入0.3mlKAC,，加入過程中輕輕混勻,，冰上放置5-10min。
　　5,、12000rpm離心10min,。
　　6、輕輕將上清轉(zhuǎn)移到含有0.8ml異丙醇的離心管,，不要吸到白色沉淀,，顛倒混勻，冰上孵育5-10min,。
　　7,、室溫12000rpm離心15min。
　　8,、小心棄去上清,，不要浮起沉淀，加入0.5mlWashBuffer,，顛倒離心管數(shù)次清洗沉淀,。
　　9、室溫12000rpm離心5min,。重復(fù)8和9,。
　　10、輕輕吸棄上清,，室溫5-10min干燥沉淀,，不要過分干燥。注意：勿使用真空離心選裝蒸發(fā)儀去干燥DNA,。
　　11,、40μlEndSolution重新溶解DNA沉淀，為避免剪切,，勿機(jī)械重懸DNA,，讓溶液順管子輕輕流下溶解DNA,。
 

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