胎牛血清使用中的常見問題

 1,、 如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

將血清從冷凍箱取出后,，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是,，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素,、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。因此,，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清，并避免反復(fù)凍融,。

我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃,。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月,。若一次無(wú)法用完一瓶,，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍,。

2,、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么,，怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,。這是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì),。要除去沉淀,，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,，沉淀會(huì)自然消失。

3,、實(shí)驗(yàn)室如何選擇適合的血清?

國(guó)內(nèi)一致認(rèn)為HYCLONE的血清是更好的,，但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷，國(guó)外一般認(rèn)為GIBCO比HYCLONE好,，所以并不是價(jià)格決定質(zhì)量,，但是總的來(lái)說(shuō)這兩種價(jià)格普遍偏貴，一般不是太嬌氣的細(xì)胞,，國(guó)產(chǎn)的就夠用了,。此外，由于國(guó)內(nèi)HYCLONE,，GIBCO并沒有生產(chǎn)線,，我們只能從代理商那里買，而代理商又魚龍混雜,，所以買到假貨的可能性也很大,。所以，我一般會(huì)從直銷員那里買血清,，有的國(guó)外生物公司由于剛剛進(jìn)入中國(guó),，度不高，但是其實(shí)在國(guó)外已經(jīng)做得很不錯(cuò)了,，如Wisent等,，他們?cè)趪?guó)內(nèi)有辦事處，我會(huì)從那里拿,，血清的品質(zhì)和HYCLONE不相上下,，但價(jià)格相對(duì)優(yōu)惠很多。

4,、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

(1)解凍血清時(shí),，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生,。

(2) 血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),，使溫度與成分均一,。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大,，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

(4) 勿將血清置于37℃太久,，否則血清會(huì)變得渾濁,，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,，從而影響血清的品質(zhì)。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要,，可以無(wú)須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活,，請(qǐng)遵守56℃,，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻,。溫度過(guò)高,，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多,。

5,、 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎?

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它,。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。

6,、 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮,，細(xì)胞和血小板釋放組胺,，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué) 研究,，培養(yǎng)ES細(xì)胞,、平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清,。

7,、 有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用,，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37℃環(huán)境中,，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物 的分裂擴(kuò)增,。

若非必須,，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間,，更確保血清的質(zhì)量!

8,、細(xì)胞培養(yǎng) 中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?

一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先,，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài),，黑點(diǎn)是否游動(dòng),。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖,，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃,、變混濁。污染包括細(xì)菌污染,、支原體污染等,。

如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好,，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,，沒有任何變化，那么,，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：

(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老,，破碎的細(xì)胞殘骸;

(2)血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果;

(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,，不宜細(xì)胞生長(zhǎng);

(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì),、容器不合格?？蓱?yīng)用離心,、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn);

(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì),，多次傳代可以消除,。

9、 細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成?

(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù),。

(2) 培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴,。

(3) 培養(yǎng)基保持適用PH值7.0- 7.2,。

(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗,。

(5) 掌握細(xì)胞傳代的合適時(shí)機(jī),，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。

10,、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?

來(lái)源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛,。

組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子,、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,，用途與用法不同：某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng),，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可，使用濃度不同,，一般在5%-10%,，有特殊要求的濃度在20%。

血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,，若存放在4℃不可超過(guò)一個(gè)月,。解凍血清時(shí) ，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,，并經(jīng)常搖勻使之溶解,，然后至室溫放置使之升溫，不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,，如放在37℃解凍,，顏色加深，粘稠度也會(huì)增加,，血清在解凍和熱滅活后,，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，避免反復(fù)凍融,。