4.ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料,。打開(kāi)ATCC網(wǎng)頁(yè)的Cells and hybridomas鏈接，輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫(kù),。數(shù)據(jù)庫(kù)中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述,，包括細(xì)胞的來(lái)源，培養(yǎng)和凍存條件,，以及相關(guān)文獻(xiàn)等資料,。

二、液體培養(yǎng)基可以放-20℃保存嗎,？

不可以,！因?yàn)樵?20℃下，培養(yǎng)基中的鹽容易析出,，培養(yǎng)基融化后,，有的鹽可能無(wú)法重新溶解，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基滲透壓降低,，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),，細(xì)胞容易破裂而死亡,。

三、新配制的液體培養(yǎng)基能保存多久,？

我們建議將新配制的培養(yǎng)基放置于4℃,，避光保存盡量在一周內(nèi)使用完畢。培養(yǎng)基越新鮮越好,。

四,、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎,？

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_(kāi)始降解,。

五,、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？

除了特殊篩選系統(tǒng)外,，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。

為防止細(xì)菌,、真菌污染,，可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液，其培養(yǎng)基中的終濃度為青霉素100U/ml,，鏈霉素為100ug/ml,。

六、為何培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中,，顏色會(huì)偏暗紅色,，且pH值越來(lái)越偏堿性？

培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中,，培養(yǎng)基內(nèi)之CO₂ 會(huì)逐漸溢出,，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑（通常為phenol red）的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅,。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果,，將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí),，可以通入無(wú)菌過(guò)濾之CO₂,，以調(diào)整pH 值。

七,、培養(yǎng)液pH是怎樣影響細(xì)胞生長(zhǎng)的,？

由于大多數(shù)細(xì)胞適宜PH值為7.2-7.4，偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對(duì)PH值要求也不全部相同,，原代細(xì)胞培養(yǎng)一般對(duì)PH值變動(dòng)耐受差，無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng),。但總體來(lái)說(shuō),，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些，偏酸環(huán)境中更有利于細(xì)胞的生長(zhǎng),。因此,，配制培養(yǎng)用液時(shí)可把液體的PH值稍微調(diào)的偏酸一些。液體在經(jīng)過(guò)0.1um或0.2um濾膜過(guò)濾時(shí),，PH值會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右,。

八、為什么液體培養(yǎng)基1640顏色發(fā)黃,，是pH值不對(duì)嗎,？

不是。因?yàn)榕浞皆颍?640為堿酚紅型,，其中酚紅的濃度只有DMEM的四分之一,，所以是因?yàn)榉蛹t濃度低，而非PH值低,。

九,、為什么有客戶要求培養(yǎng)基中不含酚紅？

研究表明,，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）,。為避免固醇類反應(yīng)，細(xì)胞培養(yǎng),，尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí),，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè),，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí),，不使用加酚紅的培養(yǎng)基。

十,、放置在冰箱中的培養(yǎng)基顏色會(huì)發(fā)生變化,，為什么？

培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中,，培養(yǎng)基內(nèi)CO₂會(huì)逐漸溢出,，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性。而培養(yǎng)基中酸堿指示劑（通常為phenol red）的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅,。培養(yǎng)基偏堿后再用于細(xì)胞培養(yǎng)將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡,。培養(yǎng)基偏堿時(shí)，可以通入無(wú)菌過(guò)濾的CO₂,，以調(diào)整pH值,。

十一,、無(wú)血清培養(yǎng)與有血清培養(yǎng)使用的抗生素量一樣嗎？

當(dāng)在無(wú)血清培養(yǎng)基中添加抗生素時(shí),，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%,。因?yàn)檠逯械牡鞍讜?huì)結(jié)合和滅活一些抗生素。而在無(wú)血清培養(yǎng)條件下,，抗生素不被滅活,。

十二、培養(yǎng)基各個(gè)成分的作用有哪些,？

1.NaHCO₃的作用是什么,？

與二氧化碳一起形成緩沖系統(tǒng)，保持培養(yǎng)基PH值穩(wěn)定,。

2.丙酮酸鈉的作用是什么,？

丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,，但是如果沒(méi)有葡萄糖的話,，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM,，-20℃保存,，培養(yǎng)基中的終濃度為1mM.

3.加入HEPES有何好處？

培養(yǎng)基中經(jīng)常用的Buffer system是碳酸氫鹽,，它可提供營(yíng)養(yǎng),，但卻在生理PH值條件下會(huì)降低緩沖能力。而HEPES是一種很強(qiáng)的Buffer,，加入HEPES能使細(xì)胞培養(yǎng)基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強(qiáng),。HEPES的貯存液濃度一般為1M，常溫保存,。培養(yǎng)基中的終濃度為25mM,，即5ml 1M的HEPES加入到200ml全部培養(yǎng)基中。

4.酚紅的作用是什么,？

酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為PH值指示劑：中性時(shí)為紅色,，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色,。

5.谷氨酰胺的作用是什么,？

幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺都有較高的要求。谷氨酰胺脫掉氨基后,，可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源,，參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡,。所以,，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,，應(yīng)置-20℃冰凍保存,，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí),，應(yīng)重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺。

試驗(yàn)操作中常配制高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）,，分裝使用,，-20℃保存。使用時(shí),，每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml全部培養(yǎng)基中,，使其終濃度為2mM培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基常見(jiàn)問(wèn)題

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