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MBL-常見緩沖液配制方法全解答

時(shí)間：2023/11/28閱讀：2410

緩沖液是一種可以抵抗溶液中因加入少量酸,、堿而產(chǎn)生的pH變化的液體,。一般由弱酸及其弱酸鹽或者弱堿及其弱堿鹽配制而成,。生物的生化反應(yīng),，很多都需要一個(gè)穩(wěn)定pH環(huán)境才能發(fā)生，比如血液就是一種緩沖體系,。除了pH會(huì)影響生化反應(yīng)效率外,，緩沖液中的某些離子也可能會(huì)產(chǎn)生一些不必要的反應(yīng)，妨礙目標(biāo)實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行,。因此在生命科學(xué)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)中,，研究者們需要慎重地選擇緩沖體系,。本期就為大家整理一些常用緩沖液的配制方法,。

磷酸緩沖液（PBS）

PBS的緩沖pH值范圍非常廣，可配置各種pH值的酸,、堿,、中性緩沖液，是最常見的緩沖體系之一,。

配制酸性磷酸緩沖液可直接用NaH?PO?或KH?PO?,，pH范圍在1-5；堿性緩沖液可直接用Na?HPO?或K?HPO?,，pH范圍在9-12,；中性緩沖液則用等濃度的NaH?PO?和Na?HPO?或者等濃度的NaH?PO?和Na?HPO?溶液混合,，pH在5.5-8.5。

PBS的緩沖能力強(qiáng),，應(yīng)用范圍廣,，但也有缺點(diǎn)：

① 易與常見的鈣離子Ca2?、鎂離子Mg2?等重金屬離子結(jié)合形成沉淀,。

② 會(huì)抑制某些反應(yīng),，比如抑制某些酶的催化作用。

以0.2mol/L中性磷酸緩沖液為例,，不同摩爾濃度緩沖液加純化水稀釋即可（緩沖液的摩爾濃度指的是磷酸根的濃度,，所以若稀釋后pH值有微小變化需要調(diào)整，不要用帶有磷酸根的溶液）：

磷酸氫二鈉（Na?HPO?*,，0.2mol/L）：28.39g/L,；

磷酸二氫鈉（NaH?PO?*，0.2mol/L）：24g/L

*注意是否是水合物,，水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量,。

不同pH的PBS可由不同比例的上述溶液混合而成。

配制100mL PBS緩沖液所用量如下圖所示：

硼酸緩沖液（BBS）

BBS一般由硼砂和硼酸配制,，是堿性范圍內(nèi)常用緩沖液,。BBS的缺點(diǎn)是能和很多代謝產(chǎn)物生成絡(luò)合物，比如和糖反應(yīng)形成穩(wěn)定的復(fù)合物而導(dǎo)致緩沖能力下降,。

以0.2mol/L硼酸緩沖液為例,，不同摩爾濃度緩沖液加純化水稀釋即可（如需后續(xù)調(diào)整pH，同磷酸緩沖液一樣,，不要用含有硼酸根的溶液）：

硼砂（Na?B?O?·10H?O*,，0.2mol/L）：76.27g/L；

硼酸（H?BO?*,，0.2mol/L）：12.37g/L

*注意是否是水合物,，水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量。

不同pH的BBS可由不同比例的上述溶液混合而成,。

配制10mL BBS緩沖液所用量如下圖所示：

需要注意的是：硼砂易失去結(jié)晶水,，必須保存在帶塞子的瓶中。

碳酸緩沖液（CBS）

CBS一般由碳酸和碳酸氫鈉配制,，多為堿性,。

以0.2mol/L碳酸緩沖液為例，不同摩爾濃度緩沖液加純化水稀釋即可（pH調(diào)整,，同上）：

碳酸鈉（Na?CO?*,，0.2mol/L）：21.2g/L；

碳酸氫鈉（NaHCO?*,，0.2mol/L）：16.8g/L

*注意是否為水合物,，水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量,。

不同pH的CBS可由不同比例的上述溶液混合而成。

配制50mL CBS緩沖液所用量如下圖所示：

檸檬酸緩沖液（CPBS）

CPBS一般由碳酸和碳酸氫鈉配制,，常用于分子實(shí)驗(yàn)的雜交處理液和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的抗原修復(fù),、暴露等。檸檬酸容易與鈣離子結(jié)合產(chǎn)生沉淀,，反應(yīng)中應(yīng)避免鈣離子混入,。

以0.2mol/L檸檬酸緩沖液為例，不同摩爾濃度緩沖液加純化水稀釋即可（pH調(diào)整同上）：

檸檬酸（C?H?O?*,，0.2mol/L）：38.4g/L,；

檸檬酸鈉（C?H?Na?O?*，0.2mol/L）：51.6g/L

*注意是否是水合物,，水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量,。

不同pH的CPBS可由不同比例的上述溶液混合而成。

配制20mL CPBS緩沖液所用量如下圖所示：

Good's緩沖液

Good's緩沖液又稱為兩性離子緩沖液,。由于不干擾生物化學(xué)反應(yīng)過程,，對(duì)酶反應(yīng)等也無抑制作用，所以非常適合于對(duì)易變性或者pH敏感型蛋白的研究和實(shí)驗(yàn),。常用的Good's緩沖液有20多種,，這里只簡述在生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常見的三種。

1. MES緩沖液

MES可固體按照摩爾濃度計(jì)算用量,，配成液體后,，通過氫氧化鈉來調(diào)整PH。

以0.2mol/L MES緩沖液為例：

MES（C?H??NO?S*,，0.2mol/L）：39.05 g/L,；

*注意是否是水合物，水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量,。

常用有效緩沖范圍為pH5.5-7.7,。

2. Tris緩沖液

① Tris-HCl緩沖液

Tris固體按照摩爾濃度計(jì)算用量，配成液體后,，通過HCl來調(diào)整pH,。

以0.2mol/L Tris-HCl緩沖液為例：

MES（C?H??NO?*，0.2mol/L）：24.2 g/L,；

*注意是否是水合物,，水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量

② Tris-EDTA緩沖液

常用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究,，用于DNA的溶解和保存等,。

以1×TE緩沖液(pH8.0)為例：

●1M Tris-HCl（pH8.0）：稱取Tris12.12g，加純化水80mL溶解,，滴加濃HCl調(diào)整pH至8.0,，后定容至100mL,。

●1M EDTA（pH8.0）：稱取EDTA-Na?·H?O 18.6g，加純化水40mL,，劇烈攪拌,，滴加NaOH溶液調(diào)整pH至8.0，固體物質(zhì)充分溶解后,，定容至50mL（EDTA-Na?需在pH8.0時(shí)才會(huì)溶解）,。

●1×TE（10mM Tris-HCl，1mM EDTA,，pH8.0）：量取10mL 1M Tris-HCl,，1mL 1M EDTA溶液，充分混勻后,，定容至1L

③TAE緩沖液

將上述Tris-EDTA緩沖液調(diào)整pH的鹽酸換成冰乙酸,，即是TAE緩沖液。

注意：

1. Tris溶液會(huì)吸收空氣中的二氧化碳,，所以應(yīng)保存在使用塞子的瓶中,。

2. Tris緩沖液在不同溫度下，呈現(xiàn)的pH是不同的,，配置時(shí)應(yīng)考慮使用環(huán)境,，最好在使用環(huán)境溫度條件下進(jìn)行配制。

3. HEPES緩沖液

緩沖范圍在中性附近,。由于可以在敞開式容器中保持穩(wěn)定的pH,，所以常用于細(xì)胞培養(yǎng)，或者診斷試劑的保存溶液,。

以1M,，pH7.0的HEPES溶液為例：

HEPES稱取119.15g，溶解在400mL純化水中,，用NaOH溶液調(diào)整pH至7.0,，后定容至500mL。

Tips

緩沖液是弱酸及其弱酸鹽或弱堿及其弱堿鹽形成的共軛體,。其對(duì)pH變化的緩沖能力,，和酸堿的比例、解離常數(shù)等有關(guān),。酸堿的摩爾比越接近1:1,，緩沖能力越大。在pH= pKa±1的范圍內(nèi),，緩沖能力最佳,。

配制緩沖液時(shí)，應(yīng)根據(jù)需要的pH,，選擇相應(yīng)的緩沖液,。有些工作人員用強(qiáng)酸,，強(qiáng)堿將緩沖液快速調(diào)整至所需要的pH值。殊不知這樣pH雖然達(dá)到了,，卻也破壞了其緩沖體系,，使緩沖液失去了緩沖作用。

MBL-常見緩沖液配制方法全解答

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