如何選擇合適的細胞培養(yǎng)基,？

時間：2023/11/3閱讀：593

細胞培養(yǎng)是大多數(shù)生物實驗室都會遇到的基礎(chǔ)實驗,，但不是非常簡單的實驗,。細胞培養(yǎng)蘊含著大學(xué)問,。細胞培養(yǎng)狀態(tài)不好相信每個細胞培養(yǎng)者都遇到過。有時候細胞狀態(tài)不好,，轉(zhuǎn)染 ,、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細胞培養(yǎng)的因素很多,，但首要因素是選好合適的細胞培養(yǎng)基。很多研究者只對一兩種培養(yǎng)基比較了解,，下面讓我們詳細介紹一下各種培養(yǎng)基的不同之處,。

培養(yǎng)基

基礎(chǔ)培養(yǎng)基絕大多數(shù)是建立在平衡鹽溶液（BSS）基礎(chǔ)上，添加了氨基酸,、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì),。廣泛應(yīng)用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是MEM ，其中含有13種必須氨基酸,、8種維生素,。

目前科研市場經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中DMEM,、RPMI 1640,、MEM,、DMEM/F12都是應(yīng)用廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199,、IMDM,、L15培養(yǎng)基等也用于某些細胞的培養(yǎng)。

◆ MEM是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來的,，其中增加了組分的范圍及濃度,。

◆ 改良的基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)基也就是我們所說的DMEM培養(yǎng)基最初是為小鼠成纖維細胞培養(yǎng)專門設(shè)計的，現(xiàn)在常用于貼壁細胞的培養(yǎng),。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,，維生素濃度是MEM的4倍，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用,。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L,，后來為了某些細胞的生長需要，將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L,，這就是大家常說的低糖和高糖了,。

◆ a-MEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸,，它可廣泛應(yīng)用于各種細胞類型,，包括對營養(yǎng)成分要求苛刻的細胞。

◆ Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設(shè)計的,，現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng),。F12還可以與DMEM 等體積混合使用，得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物,，這種培養(yǎng)基已應(yīng)用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細胞系的培養(yǎng),。

◆ RPMI 1640培養(yǎng)基是專為淋巴細胞培養(yǎng)而設(shè)計的，現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于懸浮細胞的培養(yǎng),。

很多新人經(jīng)常困惑細胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實這個問題的答案可以很簡單,，也可以好復(fù)雜。如果這種細胞是購自細胞庫,，那您直接問供應(yīng)商就行了,，他們會給您一個很合適的推薦。如您不知道細胞的來源,，您也可以找到相關(guān)的文獻,，基本文獻中使用的培養(yǎng)基都可作為參考。但如果你是著手建立一種全新細胞的培養(yǎng)體系,，根本找不到任何參考,，那你就得花點時間自己試驗。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長,?？傊xMEM做貼壁細胞培養(yǎng),、RPMI 1640做懸浮細胞培養(yǎng)會是一個好的開始,。最好同時選購幾種不同的培養(yǎng)基同時進行培養(yǎng)實驗來選擇其中特別適合的。有時候你會驚訝地發(fā)現(xiàn)你的最佳培養(yǎng)條件與文獻報道的不同,，就算是同一種培養(yǎng)條件,，細胞的生長狀態(tài)也時好時壞，這是很正常的,。因為試劑,、水、不同批號的血清之間都存在著差異,。要提高培養(yǎng)基的穩(wěn)定性,，可以從培養(yǎng)基和血清兩方面入手。

以前大部分實驗室都是用干粉培養(yǎng)基,，但干粉有很多弊端

1. 配制過程就較為繁瑣,，要溶解、調(diào)pH值,，過濾,，過程中可能會產(chǎn)生一些濃度誤差;

2.有些實驗室的水質(zhì)并不理想，所以培養(yǎng)的效果會有差異,。

如果使用液體培養(yǎng)基,，這種人為的誤差會減少，因為畢竟是大批量工業(yè)化生產(chǎn)的,，批間差會很小,。

血清

說到細胞培養(yǎng)，血清固然是細胞培養(yǎng)中不可少的成分,，但血清的批間差異大,，更換血清時需要做大量的測試以取保替換的血清與原來的相似。而血清的供應(yīng)也是必須要考慮的因素,。由于氣候或瘋牛病等的影響,，血清貨源的問題對實驗的影響可非同小可。另外,，血清的價格也很昂貴，高品質(zhì)的澳洲血清價格更高,。因此,，也有一些實驗室開始換用無血清培養(yǎng)基。

無血清培養(yǎng)基(Serum-Free Media)

通常以SFM表示，顧名思義,，就是在細胞培養(yǎng)中不需要添加血清,，但是在某些應(yīng)用中可能要添加生長因子或細胞因子。無血清培養(yǎng)基中添加了血清的主要成分：粘附因子,、生長因子,、必需的營養(yǎng)物質(zhì)和激素等，能減少上述血清帶來的不利因素,，使細胞培養(yǎng)的條件更穩(wěn)定,。但它也不是特別好的，從有血清培養(yǎng)過渡到無血清培養(yǎng)的條件并不像想象中那么直截了當,。處于發(fā)育的不同分化階段的細胞(例如干細胞與定向前體細胞相比)需要不同的配方,，對生長因子和細胞因子的選擇尤為重要。而且在去除血清的同時,，也去除了一些血清蛋白具有的保護,、解毒作用，因此對試劑,、水的純度和儀器清潔度的要求更高,。另外，它的價格也比普通的培養(yǎng)基貴很多,。

細胞培養(yǎng)基應(yīng)用選擇
選擇培養(yǎng)基沒有固定的標準,，有幾點建議可供您參考：
（1）建立某種細胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細胞第一個要選的培養(yǎng)基?？梢圆殚唴⒖嘉墨I,，或在購買細胞株時咨詢。
（2）其它實驗室慣用的培養(yǎng)基不妨一試,，許多培養(yǎng)基可以適合多種細胞,。
（3）根據(jù)細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養(yǎng)基,。如小鼠細胞株多選 RPMI1640,。
（4）用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細胞，觀察其生長狀態(tài),，可以用生長曲線,、集落形成率等指標判斷，根據(jù)實驗結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基,，這是最客觀的方法,，但比較繁瑣。

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