配對(duì)抗體的制備與篩選

時(shí)間：2022/2/17閱讀：1540

配對(duì)抗體指的是可以同時(shí)結(jié)合在一個(gè)抗原分子上的兩個(gè)抗體。配對(duì)抗體,，一般應(yīng)用于雙抗夾心法 ELISA 實(shí)驗(yàn),。

抗體配對(duì)的原理

通常情況下，一個(gè)抗原分子擁有多個(gè)抗原決定簇,，將抗原注射入動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行免疫,，針對(duì)不同的抗原決定簇會(huì)產(chǎn)生不同的抗體。產(chǎn)生的抗體具有特異性與專(zhuān)一性,，即一個(gè)抗體分子只會(huì)特異性地結(jié)合一個(gè)抗原決定簇,。兩個(gè)針對(duì)不同抗原決定簇的抗體，有可能同時(shí)結(jié)合到抗原分子上,。如果兩個(gè)抗體同時(shí)結(jié)合到同一個(gè)抗原分子上,，那么這兩個(gè)抗體就是配對(duì)抗體。

配對(duì)抗體的制備與篩選

需要注意的是,，即使兩個(gè)抗體針對(duì)的是不同的抗原決定簇,，也并不意味著這兩個(gè)抗體分子一定可以同時(shí)與抗原分子結(jié)合。當(dāng)一個(gè)抗體與抗原結(jié)合后,，有可能會(huì)導(dǎo)致其他結(jié)合位點(diǎn)（抗原決定簇）構(gòu)型的改變,，從而導(dǎo)致其他的抗體無(wú)法正常結(jié)合到抗原上,。位阻效應(yīng)的存在，也可能使兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)距離較近的抗體無(wú)法同時(shí)結(jié)合在抗原上,。因此想要得到可以同時(shí)結(jié)合在抗原分子上的配對(duì)抗體,，在制備出抗體后，還需要對(duì)得到的抗體進(jìn)行篩選,。這就意味著,，要制備配對(duì)抗體，要完成以下兩步工作：抗體的制備,；配對(duì)抗體的篩選,。

抗體制備

為了便于后續(xù)的篩選，制備的抗體應(yīng)為單克隆抗體,，通常利用雜交瘤技術(shù)進(jìn)行單克隆抗體的制備,。注意：如果單克隆抗體很少，很可能會(huì)找不到可以配對(duì)的抗體,，因此,，在免疫動(dòng)物的時(shí)候，應(yīng)多免疫幾只動(dòng)物,，以獲得更多的單克隆抗體,。

配對(duì)抗體的篩選

通常，配對(duì)抗體篩選的方法是雙抗夾心 ELISA 法,。篩選的原理為：在得到了單克隆抗體后,，從中取出兩種單克隆抗體，一種作為捕獲抗體,，另一種作為標(biāo)記抗體（HRP 酶標(biāo)記）,，將捕獲抗體包被在抗原板上,，先加入抗原,，孵育后洗去未結(jié)合的抗原，再加入標(biāo)記抗體孵育后洗去未結(jié)合的標(biāo)記抗體,，最后加入顯色液顯色,。如果可以顯色，說(shuō)明標(biāo)記抗體與抗原特異性結(jié)合,，該捕獲抗體與標(biāo)記抗體為一對(duì)配對(duì)抗體,。如果不能顯色，說(shuō)明標(biāo)記抗體不能與抗原結(jié)合,，從而被洗脫,，該捕獲抗體與標(biāo)記抗體不是配對(duì)抗體。如果選擇的兩種單克隆抗體不能進(jìn)行配對(duì),，則需重新選擇兩種單抗,，重新進(jìn)行試驗(yàn)，直至找出可以配對(duì)的抗體。

配對(duì)抗體的應(yīng)用

利用雙抗夾心法對(duì)目的抗原進(jìn)行定性定量的檢測(cè),，必須要用到可以同時(shí)與目的抗原結(jié)合的配對(duì)抗體,。對(duì)于比較常見(jiàn)的目的抗原，可以通過(guò)購(gòu)買(mǎi)試劑盒的方式得到相應(yīng)配對(duì)抗體,。但是市面上試劑盒的種類(lèi)有限,，有些目的蛋白在市面上無(wú)法買(mǎi)到對(duì)應(yīng)的試劑盒，為了進(jìn)行雙抗夾心法 ELISA 實(shí)驗(yàn),，需進(jìn)行相應(yīng)的配對(duì)抗體的生產(chǎn),。

配對(duì)抗體的制備與篩選

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