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流式細(xì)胞儀的工作原理

閱讀:1698      發(fā)布時(shí)間:2022-4-25
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  流式細(xì)胞儀的工作原理是:將待測(cè)細(xì)胞經(jīng)特異性熒光染料染色后放入樣品管中,,在氣體的壓力下進(jìn)入充滿鞘液的流動(dòng)室。在鞘液的約束下細(xì)胞排成單列由流動(dòng)室的噴嘴噴出,,形成細(xì)胞柱,。流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源,。經(jīng)過(guò)聚焦整形后的光束,垂直照射在樣品流上,,被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下,,產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。這兩種信號(hào)同時(shí)被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收,。光散射信號(hào)在前向小角度進(jìn)行檢測(cè),,這種信號(hào)基本上反映了細(xì)胞體積的大小,;熒光信號(hào)的接受方向與激光束垂直,,經(jīng)過(guò)一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,形成多個(gè)不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào),。
 
  這些熒光信號(hào)的強(qiáng)度代表了所測(cè)細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度,,經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號(hào),再通過(guò)模/數(shù)轉(zhuǎn)換器,,將連續(xù)的電信號(hào)轉(zhuǎn)換為可被計(jì)算機(jī)識(shí)別的數(shù)字信號(hào),。計(jì)算機(jī)把所測(cè)量到的各種信號(hào)進(jìn)行計(jì)算機(jī)處理,將分析結(jié)果顯示在計(jì)算機(jī)屏幕上,,也可以打印出來(lái),,還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲(chǔ)在硬盤(pán)上以備日后的查詢或進(jìn)一步分析。
 
  檢測(cè)數(shù)據(jù)的顯示視測(cè)量參數(shù)的不同由多種形式可供選擇,。單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形式表達(dá),,其X軸為測(cè)量強(qiáng)度,Y軸為細(xì)胞數(shù)目,。一般來(lái)說(shuō),,流式細(xì)胞儀坐標(biāo)軸的分辨率有512或1024通道數(shù),這視其模數(shù)轉(zhuǎn)換器的分辨率而定,。對(duì)于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù),,既可以單獨(dú)顯示每個(gè)參數(shù)的直方圖,也可以選擇二維的三點(diǎn)圖,、等高線圖,、灰度圖或三維立體視圖。
 
  細(xì)胞的分選是通過(guò)分離含有單細(xì)胞的液滴而實(shí)現(xiàn)的,。在流動(dòng)室的噴口上配有一個(gè)超高頻電晶體,,充電后振動(dòng),使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,,待測(cè)定細(xì)胞就分散在這些液滴之中,。將這些液滴充以正負(fù)不同的電荷,當(dāng)液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板時(shí),在高壓電場(chǎng)的作用下偏轉(zhuǎn),,落入各自的收集容器中,,不予充電的液滴落入中間的廢液容器,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離,。對(duì)分選出的細(xì)胞可以進(jìn)行培養(yǎng)或其它處理,,做更深的研究。

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