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超濾離心管如何使用
閱讀：1932 發(fā)布時(shí)間：2021-8-11
超濾離心管如何使用,？
超濾離心管如何使用？
【問】：millipore超濾離心管想重復(fù)使用，請問如何清洗和保存,？
最近使用超濾管,，由于管子較貴，想重復(fù)用幾次,，但找不到可靠的資料,。不知如何清洗和保存，比如有人說用DIE氮化鈉,，有人說用氫氧化鈉,，有人說用乙醇浸泡。莫衷一是,。很急用,。
【回答精要】
使用后用0.1M NaOH泡24h，然后20%乙醇浸泡保存,。
這個我是聽老板們說的,，的確乙醇泡完后孔徑會增大，基本就是5-10KD最大,，也就是說如果你的蛋白在21KD以上,，應(yīng)該沒問題?；蛘呖梢圆挥靡掖寂?，用NaOH洗之后直接用無菌水保存，每周換一下液體,，應(yīng)該沒有問題。
看看說明書不就結(jié)了,！我原來在CRO的時(shí)候一直是重復(fù)用的,，也沒見什么不好啊,！短期會用的話,，用20%的乙醇泡著，回頭拼命用millipore的水充干凈,，然后在用樣品緩沖液平衡一下就好,，至于有些人說的改變孔徑，也沒那么大影響的,，你至少跟目的蛋白分子量差別3倍的截留分子量才安全的不是嗎?1個月以內(nèi)不用的話,，建議用100mM的NaOH保存！更長時(shí)間的話加0.02%的疊氮鈉,，但那個東西強(qiáng)致癌物,，不建議使用。
理論上截留目標(biāo)物,，孔徑應(yīng)選1/3~1/5的膜,；透過目標(biāo)物,，孔徑應(yīng)選5-10倍的膜。
【問】準(zhǔn)備用millipore 的超濾離心管從細(xì)胞培養(yǎng)上清液中濃縮蛋白,，在園子里找到一些關(guān)于濃縮蛋白的一些帖子,，但還有些問題還是向園子里的大蝦請教一下。我們定的是Amicon Ultra 15ml規(guī)格的管子,，不知道有沒有誰以前做過的,，有關(guān)于轉(zhuǎn)速，時(shí)間給一些建議,，另外細(xì)胞上清液離心前是否需要什么預(yù)處理,？離心之后回收蛋白時(shí)怎么盡量減少損失？如果要把管子重復(fù)利用,，NaoH清洗后,，如何在20%的乙醇中保存？是將其浸到乙醇中防于4度,，還是在管子中灌入乙醇,？
【回答精要】
我用過5ml的管子，當(dāng)時(shí)使用的轉(zhuǎn)速是4000rpm 8min,，可以把5ml的樣品液濃縮到約200ul,，這僅供參考，具體情況還要由您的樣品決定,。
我保存5ml管子的方法是把內(nèi)管取出,，浸泡于裝有20％乙醇的燒杯中。四度保存,。
該種管子可以脫鹽濃縮但不宜根據(jù)截留半徑做分離蛋白用,。
我用的是3500g，4度離心,，時(shí)間可以自己控制,，取決于你最終的濃縮體積，我一般是200ul左右,。
千萬別一下離心時(shí)間太長,，不同的蛋白濃縮的速度不同，有的需要長時(shí)間離心,，有的則一下子就好,。當(dāng)然也和你的蛋白是否比較純，所用的是什么buffer,，還有蛋白的濃度有關(guān)系,。所以離心時(shí)要先短些時(shí)間觀察一下你的濃縮速度，不要一下子濃縮過了，甚至形成沉淀就得不償失了,。
另外其實(shí)他們的管子都設(shè)計(jì)的是一次性使用,，所以如果想重復(fù)使用，不要離得速度太高,，4000－4500RPM就差不多了,，另外重復(fù)使用時(shí)要看看管壁上有沒有裂紋，現(xiàn)在的管子好像不如從前的結(jié)實(shí)了,。
用后把管子用純水洗干凈,，離心少時(shí)，洗一下膜,，再象propeg主任說的那樣收起來即可,。使用多次后若覺得有些堵，就可以用NaOH泡泡,，離心幾分鐘,，應(yīng)該會有改善。
純化多肽,，截?cái)喾肿恿靠梢赃x10倍,，純化球蛋白，截?cái)喾肿恿靠梢赃x3倍,，如管子要重復(fù)使用,，轉(zhuǎn)速設(shè)最大轉(zhuǎn)速（G）的80％左右，不然時(shí)間長了塑料就裂了,，膜也容易出問題,。
離心后管子用MilliQ水清洗干凈，浸泡在水中,，4度保存就行了,，不放心就放點(diǎn)防腐劑，但是這個管今后只能用來離心同類的樣品哦,。
超濾損失蛋白是正常的，樣品體積大就分批離心,，別搞的離心時(shí)間太長,，樣品里的雜質(zhì)如果可能盡量在離心前去除一些。
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