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細胞培養(yǎng)板的選擇和使用
細胞培養(yǎng)板的選擇和使用
細胞培養(yǎng)板的選擇和使用
細胞培養(yǎng)板作為培養(yǎng)細胞的一種常用和重要的工具,，形狀,、規(guī)格,、用途多樣,。
你是否也為如何選擇適合的培養(yǎng)板而迷茫？
你是否正為如何方便,、正確使用培養(yǎng)板而苦惱,？
你對如何處理培養(yǎng)板是否也有困惑？
對不同的培養(yǎng)板各有什么妙用你又有何體會,？
培養(yǎng)板的選擇
1）細胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底（U型和V型）,；
2）培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12,、24,、48、96,、384,、1536 孔等；
3）根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細胞培養(yǎng)板,。具體選擇時根據(jù)培養(yǎng)細胞的類型,、所需培養(yǎng)體積及不同的實驗?zāi)康亩ā?/span>
平底和圓底（U型和V型）培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇
1）貼壁細胞一般用平底培養(yǎng)板。
2）懸浮型細胞的培養(yǎng)一般用V型,。
3）U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細胞 ,。
4）V型培養(yǎng)板有時用做免疫學(xué)血凝集的實驗。
不同型狀的板子自然有不同用途
平底的什么類型的細胞都可用,，但當(dāng)細胞數(shù)目較少,，如做克隆時，就用96孔平底板,。
另外﹐做MTT等實驗時﹐無論貼壁和懸浮細胞﹐一般均用平底板,。
至于U或V型板﹐一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學(xué)方面﹐當(dāng)做兩種不同淋巴細胞混合培養(yǎng)時﹐需要二者相互接觸以刺激,。因此﹐一般需要U型板﹐因細胞會由于重力的作用而聚集在一個很小的范圍內(nèi),，V型板的用途更少﹐一般用于細胞殺傷實驗時﹐為了使效靶細胞緊密接觸﹐常使用V型板﹐但這種實驗也可用U型板替代(加入細胞后﹐低速離心）。
如果是養(yǎng)細胞的話,， 通常是運用平底的,， 另外要特別注意材質(zhì)， 標(biāo)示"Tissue Culture (TC) Treated"就是養(yǎng)細胞用的,。
圓底的通常是拿來做分析,， 化學(xué)反應(yīng),， 或是保存樣品用。因為圓底比較好將液體吸得干凈,， 如果用平底的就不好吸了,。 不過， 如果你是要測吸光值的話,， 一定要買平底的才行,。
大部分細胞培養(yǎng)都用平底培養(yǎng)板，便于鏡下觀測,、有明確的底面積,、細胞培養(yǎng)液面高度相對一致，還便于MTT檢測,。
圓底培養(yǎng)板主要用于同位素摻入的實驗,，需要用細胞收集儀收集細胞的培養(yǎng)，如“混合淋巴細胞培養(yǎng)"等,。
問題集錦
問：我看到培養(yǎng)板有4,、6、12,、24,、48、96孔幾種規(guī)格 ,，但不知道到底什么實驗用哪種規(guī)格,，請指教。
答：要根據(jù)你具體的實驗要求,，流式一般用6孔，MTT一般用96孔,，細胞爬片一般用24孔等,！要具體根據(jù)你實驗來定！
問：請問哪位高手知道Terasaki板是什么培養(yǎng)板,，與普通細胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別,？謝謝！,！
答：Terasaki plate主要是用于晶體學(xué)研究,，產(chǎn)品設(shè)計便于對晶體的觀察與結(jié)構(gòu)分析。
有兩種sitting 和handing drop兩種方法,，兩種方法應(yīng)用產(chǎn)品的外形結(jié)構(gòu)也不同,。
材料上選擇crystal class polymer ，特殊的材料有利觀察晶體結(jié)構(gòu),。
細胞培養(yǎng)板主要是PS材料,。材料是treated sufface。便于細胞貼壁生長與伸展。當(dāng)然還有浮游細胞的生長材料,，同時還有l(wèi)ow binding surface,，有關(guān)更多實驗材料上的應(yīng)用與對材料的選擇。
問：我想測吸光度用酶標(biāo)儀,，用多孔細胞培養(yǎng)板行嗎,？請問酶標(biāo)板 多孔細胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別？
答：用多空細胞培養(yǎng)板測吸光度肯定可以拉,，我們經(jīng)常用它來做樣品的蛋白定量和MTT檢測,。
區(qū)別：酶標(biāo)板一般要比細胞培養(yǎng)板貴,，細胞板主要做細胞培養(yǎng),，但也可以用來測蛋白濃度；酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板,，一般不能用做細胞培養(yǎng),，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測,，它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液。
如下是個用酶標(biāo)板檢測冠狀病毒IgM/IgG抗體例子
【操作步驟】
1．加樣品：將標(biāo)本稀釋液100ul（或2滴）加到包被板內(nèi)（預(yù)留陰陽性及空白對照2－5孔）,，將待檢血清用PBS或生理鹽水按1：20稀釋后取10ul加入反應(yīng)孔內(nèi),。
2．加對照：加入陰性對照1－3孔，陽性對照1孔,，各100ul對照血清,。空白對照1孔空置,。
3．溫育：將反應(yīng)板震蕩使樣品混勻后,，置37℃溫箱或水浴反應(yīng)20分鐘。
4．洗板：用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml,。（1）手洗：將反應(yīng)板孔內(nèi)容物傾出,，將洗滌液注滿反應(yīng)孔，放置30秒鐘后用力甩去,，如此重復(fù)5次后拍干,。（2）機洗：5次，每孔注入洗滌液200ul或注滿,，停留30秒鐘后吸盡拍干,。
5．加酶標(biāo)工作液：每孔加入100ul（或2滴）酶標(biāo)工作液，置37℃溫箱反應(yīng)20分鐘后,，洗板5次,，洗板操作同步驟4。
6．顯色和終止反應(yīng)：將底物A,、B液各50ul（或1滴）加到反應(yīng)孔內(nèi),，37℃避光顯色10分鐘,。每孔加入終止液50ul（或1滴）混勻終止反應(yīng)。
【結(jié)果判定】
1．酶標(biāo)儀設(shè)定波長450nm,，先用空白調(diào)零,，然后測定各孔OD值；如果選用雙波長測定,，不必設(shè)置空白對照孔,。
2．當(dāng)陰性對照平均OD值小于0.08，陽性對照（pc）OD值大于0.30時,，說明試劑盒有效且實驗操作正確,，否則應(yīng)當(dāng)重復(fù)試驗。
3．臨界值（CUT—OFF VALUE）＝0.15＋陰性對照平均（NC）OD值（當(dāng)陰性平均OD值小于0.05時,，按0.05計算,；當(dāng)陰性平均OD值大于或等于等于0.05時按實際值計算）。
4．標(biāo)本OD值≤臨界值為陰性,，標(biāo)本OD值>臨界值為陽性,。
常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量：不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范圍,，結(jié)合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量,。若加液量過多會影響氣體（氧氣）交換，而且在搬動過程中易溢出造成污染,。具體所加細胞密度依實驗的目的不同靈活掌握,。