細胞培養(yǎng)的具體步驟和要求以及注意事項

一、細胞復蘇

將凍存細胞從液氮中取出后,，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化,。移人15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM*培養(yǎng)基,，輕輕吹勻,，離心，2000rpmX2min,，棄上清液,。

二、細胞傳代

加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤,，轉移至15ml離心管,，2000rpmX2min，棄上清液,。再加入10ml PBS（經(jīng)高壓滅菌,，保存于40C），吹勻,，吸取10微升進行計數(shù),，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。

細胞密度達到80%～90%時,，去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次,。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,，放人細胞培養(yǎng)箱3min,。加入lmlDMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管,。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤,，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min,，棄上清液,。

凍存液的配制：70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖,。

（1）進入細胞間開始細胞培養(yǎng)時,，必須嚴格按照下列步驟操作：

②確定衣服的袖口已經(jīng)卷起或者白大褂的袖口已經(jīng)扎緊。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置,。為了方便單手開啟瓶蓋,，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的,，必須及時更換,。

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