Precellys:從受感染的組織中提取病毒RNA
本篇應(yīng)用出自比利時(shí)勒芬大學(xué)的一個(gè)實(shí)驗(yàn)室,該實(shí)驗(yàn)室主要研究抗病毒化學(xué)治療,。為了評(píng)估發(fā)現(xiàn)的抗病毒化合物的活性,用抗病毒化合物處理受到病毒感染的老鼠,,并提取了特定病毒復(fù)制的組織,,做下一步研究。
實(shí)驗(yàn)材料
Precellys 24組織研磨器或Precellys Evolution+Cryolys制冷系統(tǒng),;
2ml Precellys裂解管CK28(2.8mm陶瓷珠,,P000911-LYSK0-A.0);
30-75mg老鼠胰腺,;
Buffer:將體積調(diào)節(jié)至重量體積比為5%,。
實(shí)驗(yàn)程序
Precellys 24參數(shù)為轉(zhuǎn)速6500rpm,研磨3個(gè)循環(huán),,每個(gè)循環(huán)5s,,間歇10s;
Precellys Evolution+Cryolys制冷參數(shù)為轉(zhuǎn)速7500rpm,,研磨3個(gè)循環(huán),,每個(gè)循環(huán)5s,間歇10s,,溫度設(shè)定為4°C,。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
研磨老鼠胰腺之后,勒芬大學(xué)實(shí)驗(yàn)室做了以下研究:1.首先加入RLT裂解液,,之后從上清液中提取病毒RNA,;圖一為經(jīng)過(guò)病毒誘導(dǎo)的老鼠胰腺里病毒RNA的含量變化,是提取總RNA之后實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果,;
圖一
圖二為傳染性的病毒復(fù)制過(guò)程,,把研磨之后的勻質(zhì)液加入到生長(zhǎng)介質(zhì)中,使用生理鹽水處理,,上清液被滴定到細(xì)胞培養(yǎng)板(96孔板,,傳染性的病毒效價(jià)表示為“-log CCID50/ml”,其中CCID50代表細(xì)胞培養(yǎng)感染劑量50%,,是表達(dá)病毒庫(kù)效價(jià)的一種度量),。
圖二
結(jié)論:Precellys 24組織研磨器可以幫助我們?cè)u(píng)估新發(fā)現(xiàn)的抗病毒化合物的活性,我們也可以使用Precellys組織研磨器來(lái)提取病毒RNA和傳染性的病毒,。
Precellys生物樣品研磨器:
超快速: up to 10 000 rpm
超靈活: 0.5, 2, 7和 15mL研磨管
超高效: 強(qiáng)力3D振動(dòng)
超保護(hù): Cryolys Evolution新型冷卻技術(shù),,無(wú)需液氮和壓縮空氣