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使用Coriolis MICRO空氣采樣器結(jié)合基于基因芯片技術(shù)的多重PCR檢測

——推動(dòng)檢測多種氣傳真菌種類的超快速檢測系統(tǒng)的發(fā)展

氣傳真菌能夠引起一些生物腐蝕和健康問題。為了避免這些損害,，在一些室內(nèi)環(huán)境例如工廠,、博物館和其他一些公共場所檢測真菌菌落就顯得額外重要。然而目前常規(guī)的一些檢測真菌的方法需要一個(gè)培養(yǎng)的過程,。

有研究報(bào)道Coriolis® µ有足夠收集能力，通過PCR擴(kuò)增后，可以有效檢測單一真菌物種,，而且不需要培養(yǎng)的過程。

本次應(yīng)用中,，我們評估了一個(gè)超快速檢測系統(tǒng),，由基于基因芯片技術(shù)的多重PCR檢測系統(tǒng)GENOGATE和Coriolis® µ空氣采樣器組成，用來檢測氣傳真菌,。

本次應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)材料包括：Coriolis® µ空氣采樣器,，無菌錐形管，15ml收集液體（Bertin公司）,；基于基因芯片技術(shù)的多重PCR檢測系統(tǒng)GENOGATE（Toyo Seikan公司）,。

本次應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)過程如下圖所示：

1.使用Coriolis® µ空氣采樣器收集包括真菌孢子的微粒；

2.篩選真菌孢子并提取DNA,；

3.熒光標(biāo)記,；

4.使用通用引物進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增；

5.使用相同的引物對首輪PCR處理的樣品再一次進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增,；

6.熒光檢測分析目的基因,。

通過與ITS序列分析獲得已知的結(jié)果對比，來驗(yàn)證本次應(yīng)用中這個(gè)超快速檢測系統(tǒng)的性能,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：表1為分析基因芯片技術(shù)的檢測下限,，兩輪PCR都檢測到了不同種類的真菌；表2對比分析了兩種方法,，一種為用Coriolis® µ空氣采樣器,，用多重PCR分析；第二種為使用air IDEAL采集器收集培養(yǎng)的真菌菌落,，然后用ITS序列分析結(jié)果,。結(jié)果顯示兩種方法都檢測到了不同種類的真菌，而使用Coriolis® µ和基因芯片分析的方法檢測到的菌落形成單位都要遠(yuǎn)高于第二種方法,，分別為750cfu/62cfu和469cfu/79cfu,；使用Coriolis® µ的空氣流速的可達(dá)300L/min,，air IDEAL僅100L/min。使用Coriolis® µ空氣采樣器和基因芯片技術(shù)的超快速檢測系統(tǒng),，不需要培養(yǎng)過程,，成功檢測到不同種類的氣傳真菌。

即使在嚴(yán)重污染的環(huán)境下,，結(jié)合Coriolis® µ空氣采樣器和GENOGATE（多重PCR平臺(tái)）可以有效地分析不同種類的氣傳真菌,。這個(gè)系統(tǒng)在評估環(huán)境污染、特殊有害真菌檢測,、早期發(fā)現(xiàn)室內(nèi)環(huán)境變化方面是一個(gè)有效的工具,，當(dāng)然這個(gè)系統(tǒng)也同樣應(yīng)用于化妝品、食品,、飲品行業(yè)以及學(xué)術(shù)研究領(lǐng)域,。

Coriolis µ空氣微生物采樣器

>>在液體樣品中采集空氣中的顆粒

>>適用于病毒、細(xì)菌,、霉菌,、花粉、孢子

>>適合后續(xù)培養(yǎng)和分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)檢測方法