PriCells: 人軟骨細(xì)胞的分化          

試劑和材料：
1. 分化培養(yǎng)基：DMEM/F12（1：1）、1%ITS（胰島素,、轉(zhuǎn)鐵蛋白,、硒；V/V）,、TGF-β1 1ng/ml,、HEPES 10mmol/L；
2. 胰蛋白酶/EDTA：胰蛋白酶（0.05%）和EDTA（0.53mmol/L）PBSA配制,；
3. PBSA：無Ca^2+_,，Mg²⁺的Dulbecco′s磷酸鹽緩沖液；
4. 離心管,，15ml,；
5. 普通器皿，30ml,，或圓錐底的離心管（50ml）；

實(shí)驗(yàn)方法：
1. 從培養(yǎng)瓶中吸出生長(zhǎng)培養(yǎng)基棄之,；
2. PBSA潤(rùn)洗后棄之洗液,；
3. 加入足量的胰蛋白酶/EDTA覆蓋培養(yǎng)瓶底,；
4. 在37℃孵育5—10min（在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否脫落）；
5. 重懸細(xì)胞,，置于15ml離心管中,，300g離心5min；
6. 用1ml生長(zhǎng)培養(yǎng)基洗滌,，轉(zhuǎn)移至普通器皿或離心管中,；
7. 用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)；
8. 重復(fù)離心（620g,，10min）,，棄去上清液；
9. 用分化培養(yǎng)基將其稀釋到1×10⁶個(gè)細(xì)胞/ml,；
10. 按1ml/管分裝到新Eppendorf管中,；
11. 300g離心5min，上清保留不動(dòng),；
12. 置于37℃孵箱,；
13. 每2—3天更換培養(yǎng)基；
14. 培養(yǎng)2—3周軟骨生成,；