向細胞內遞送DNA探針和質粒等功能分子來探索細胞內的分子機制與操控細胞命運,,一直是生物醫(yī)學領域目標工作,。從小分子到如今火熱的核酸mRNA疫苗遞送都離不開藥物遞送技術,。然而,,由于大多數(shù)外源功能分子都帶有負電荷,,無法直接通過同樣帶有負電荷的細胞膜,,阻礙了細胞內分子機制的探索與細胞功能的改造。
基于微流控芯片的細胞電穿孔技術
目前,,生物醫(yī)學已開發(fā)了多種方法輔助功能分子進入到細胞內,。其中,電穿孔技術作為一種通用的細胞內遞送工具,,指在外部增加短時強電脈沖時,,細胞膜會形成瞬時微孔,大多數(shù)外源功能分子可以進出細胞,。
近年來,,隨著微流控技術的發(fā)展,基于微流控芯片的細胞電穿孔技術提高了傳統(tǒng)電穿孔的效率,。微流控芯片中微電極的間距短,,產生同樣的電場強度只需幾伏至十幾伏的電壓,避免了傳統(tǒng)電穿孔中超高壓帶來的各種問題。同時,,消耗樣品及試劑更少,,降低實驗成本。
此外,,在連續(xù)流動環(huán)境中細胞膜通透性的阻抗檢測達到了更高的靈敏度,。電穿孔技術在微流控相助下遞送效率、劑量均勻性和細胞安全性方面均獲得了顯著提高,。
應用案例
美國麻省理工學院機械工程院采用HeLa細胞進行電穿孔實驗,,由于電穿孔產生的細胞膜孔洞非常微小且不穩(wěn)定,因此采用綠色熒光蛋白進行電穿孔的表征,,利用細胞內的熒光強度程度反映電穿孔效果,。
為了更好記錄電穿孔的完整動態(tài)過程以及提高實驗效率,設計了基于微流控細胞遞送平臺。在交流電壓下有效導入熒光蛋白的活細胞超過總數(shù)50%,,保持高達90%的細胞活力,,成功實現(xiàn)了細胞電穿孔。
該系統(tǒng)主要包括纖維狀摩擦電納米發(fā)電機(FS-TENG),、基于納米通道的器件,、微流控芯片和微量注射泵。
微量注射泵再微流控中作為動力源,,通過機械裝置推動注射器,,可實現(xiàn)高精度、平穩(wěn)的液體傳輸,。該實驗過程中采用了蘭格的LSP02-18注射泵以200uL/min輸送低電導率細胞懸液,,有效保護細胞的同時進一步輔助細胞電穿孔,實現(xiàn)了細胞電穿孔動態(tài)過程的實時跟蹤。
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