如何切出理想的石蠟切片

石蠟切片是組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中應(yīng)用廣泛的方法。但在石蠟切片過(guò)程中,，經(jīng)常會(huì)遇到一些問(wèn)題：修整蠟塊總修不平整,？切片時(shí)容易碎片,、翻卷？攤片時(shí)總是鋪不平整,？

1.正確固定

  ·  組織離體后,，必須在1小時(shí)內(nèi)固定,。

  ·  固定液須是組織體積的4-10倍，濃度準(zhǔn)確,，過(guò)稀或過(guò)濃都會(huì)影響組織形態(tài)和固定效果,。如發(fā)現(xiàn)固定液變質(zhì)，如甲醛液體產(chǎn)生白色沉淀,，應(yīng)立即更換,。

  ·  固定溫度宜室溫或放于35-37℃的全封閉組織處理機(jī)內(nèi)，溫度過(guò)高,，會(huì)加快組織自溶和過(guò)度收縮,，破壞細(xì)胞內(nèi)的抗原和DNA。

  ·  固定時(shí)間不超過(guò)40小時(shí),，根據(jù)室溫和標(biāo)本不同而調(diào)整,。

2.恰當(dāng)脫水

脫水的關(guān)鍵是使低濃度的酒精脫水時(shí)間和高濃度酒精脫水時(shí)間正確搭配,。低濃度酒精可以使組織收縮減少,，更好切；高濃度酒精使組織脫水更*,。

一般情況下,，標(biāo)本脫水時(shí)間（35℃）為：75%酒精1.5小時(shí)、85%酒精2小時(shí),、95%酒精（2次）各1.5至2小時(shí),、純酒精（2次）各1.5至2小時(shí)。小標(biāo)本脫水時(shí)間與大標(biāo)本差異不大,，一般沒(méi)必要分開(kāi)（小標(biāo)本發(fā)脆往往是紙包太厚或相互粘在一起,，組織脫水不*引起的。如果時(shí)間緊急,，也可適當(dāng)縮短脫水時(shí)間,，脫水時(shí)間長(zhǎng)短，與室溫高低密切相關(guān),，同時(shí)也與組織的厚薄,、組織類(lèi)型、組織固定的程度等條件有關(guān)）,。

脫水是否*,，直接關(guān)系到組織是否能充分透明。如果脫水時(shí)加溫過(guò)高（超過(guò)50℃）,，或使用丙酮等,，容易導(dǎo)致組織收縮過(guò)度和組織發(fā)硬發(fā)脆。組織脫水引起的組織發(fā)脆有三種原因：

  ·  組織固定不佳,，酒精起到固定作用,，從而引起組織質(zhì)地發(fā)生改變,。

  ·  組織本身質(zhì)地因素，如小動(dòng)物肝臟,，在切片時(shí)溫度過(guò)低導(dǎo)致,。

  ·  假脆，由于脫水不足,，組織在浸蠟時(shí),，蠟無(wú)法滲透到組織中去，組織在高溫下“干烤”導(dǎo)致發(fā)硬發(fā)脆,，切片會(huì)出現(xiàn)粉粉的或一絲絲的現(xiàn)象,，子宮肌瘤等較硬的組織還會(huì)有一棱棱的現(xiàn)象，甚至?xí)麎K往外崩,；嚴(yán)重脫水不足的組織中間發(fā)軟,，甚至還會(huì)有水。

3.石蠟切片操作要點(diǎn)

  ·  切片前,，把切片機(jī)上相關(guān)鎖桿或螺旋擰緊,，否則可能出現(xiàn)跳片、切片厚薄不均現(xiàn)象,。

  ·  刮凈包埋盒周邊的余蠟,，否則樣品夾持可能松動(dòng)，影響切片質(zhì)量,。

  ·  正確修塊,，先粗修，厚度大約在15-30微米,，質(zhì)地較硬的組織或較小的組織應(yīng)再薄一些,。粗修至組織全部暴露后，再進(jìn)行細(xì)修,。

  ·  選擇蠟塊冷凍方式,，冰盒優(yōu)于冷凍臺(tái)。使用冰盒能加水潤(rùn)濕蠟塊,，冷凍速度快,，體積小，使用成本低,，無(wú)須外接電源,。

  ·  切片時(shí)輕握手輪，用力均勻輕柔,，搖速不宜過(guò)快或過(guò)慢,。過(guò)快會(huì)導(dǎo)致切片厚薄不均，切片難以展開(kāi),；過(guò)慢會(huì)使切片增厚,。切片要求完整,、薄、均勻,。

在切片后,，先把切片放入冷水，再移至熱水,，這樣片子會(huì)較薄,，皺褶和氣泡也少。展片水溫應(yīng)在42-55℃之間,，這和包埋蠟的熔點(diǎn)有關(guān),。水溫過(guò)高，會(huì)引起組織細(xì)胞散開(kāi),，水溫過(guò)低,，切片皺褶無(wú)法攤平。