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超高通量生物透射電鏡的樣品制備與操作
超高通量生物透射電鏡的樣品制備與操作要求非常嚴格,，以下是詳細的步驟和注意事項：
一,、樣品制備
取材
新鮮取材是關鍵，組織或細胞必須保持新鮮,，避免固定前的任何結構變化,。
取材體積要小，一般控制在1~2mm³,，以確保固定液能夠充分滲透,。
取材位置要準確，直接針對需要觀察的目的部位,，避免不必要的損傷,。
操作過程中要保持低溫，所有物品都要預冷,，以防止樣品結構變化,。
固定
固定是為了保護樣品結構，使其在后續(xù)操作中不受破壞,。固定液由固定劑和緩沖液組成,，緩沖液模仿細胞外液成分，維持穩(wěn)定的pH值和滲透壓,。
新鮮取材后立即投入4℃預冷的固定液中,，然后放入4℃冰箱固定保存。
對于無法下沉的樣品,，可以通過抽真空使其沉下去,。
脫水
脫水是為了讓包埋劑能夠滲入組織內部。常用的脫水劑有酒精,、丙酮等,。
脫水時間不宜過長，常用逐級梯度脫水,，如依次浸泡酒精濃度為30%,、50%、70%,、80%,、90%、100%的溶液,，一般浸泡時間為10~20分鐘,，最后可以用100%丙酮浸泡。
包埋
包埋包括滲透,、包埋和聚合三個步驟,。
配制包埋劑時，軟硬度要易于調節(jié),，易于滲透,。
包埋時要防止產生氣泡，聚合時的溫度要盡可能低。
切片
將經過滲透處理的樣品包埋起來后,，進行切片處理,，獲得70~90nm的切片。
染色
切片經檸檬酸鉛溶液和醋酸雙氧鈾50%乙醇飽和溶液各染色5~10分鐘,，晾干后即可在透射電鏡中觀察,。
二、操作要求
操作環(huán)境
透射電子顯微鏡需要在高真空環(huán)境下工作,，因此樣品必須保持干燥和清潔,。
操作室內應保持恒定的溫度和濕度，以防止樣品在觀察過程中發(fā)生變化,。
操作技能
操作人員需要具備專業(yè)的知識和技能,，熟悉透射電子顯微鏡的工作原理和操作流程。
在進行樣品觀察和拍攝時,，需要掌握合適的放大倍數,、焦距和曝光時間等參數。
安全防護
透射電子顯微鏡操作過程中需要接觸高電壓和高真空環(huán)境,，因此必須采取嚴格的安全防護措施,。
操作人員需要穿戴合適的防護服和手套，避免直接接觸高壓部件和真空系統(tǒng),。
維護與保養(yǎng)
定期對透射電子顯微鏡進行維護和保養(yǎng),，包括清潔鏡頭、檢查真空系統(tǒng),、調整電子束等,。
保持設備的穩(wěn)定性和準確性，確保實驗結果的可靠性,。