F-*0：                                                  100μl/支

pUC19 (control vector,，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

F^- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (Str^R) endA1 nupG 

產(chǎn)品說明

*0菌株來源于MC1061,，是目前實驗室常用的感受態(tài)細(xì)胞之一，基因型與DH10B高度類似 (DH10B為galE15型,，而*0為galU型),。*0生長速度快，37℃,，10小時可見克隆,。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取?？捎糜跇?gòu)建克隆,，藍(lán)白斑篩選等實驗。

快速轉(zhuǎn)化操作方法 (10min)

1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱

2. F-*0感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,，迅速插入冰中,，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻,,，冰中靜置5分鐘。

3. 用200μl槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的2YT或LB培養(yǎng)基上,。

4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng),。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h,。

快速熱激轉(zhuǎn)化操作方法 

(25min,可提高轉(zhuǎn)化效率)

1. F- *0感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化,，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物)并用手打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置5分鐘,。

2. 42℃水浴熱激45秒,，迅速放回冰上并靜置2分鐘 (晃動會降低轉(zhuǎn)化效率)。加入700 μl 不含抗生素的LB,，37℃,，200 rpm 復(fù)蘇10分鐘，涂板 (均勻，表面無水漬),。

3. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng),。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15h,。

注意事項

1. F-*0快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞也可進(jìn)行熱激操作,，對于>7 kb質(zhì)粒的構(gòu)建，為了提高轉(zhuǎn)化效率可按以下步驟操作：F-*0感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,，插入冰中,，5分鐘后，加入目的DNA并用手打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置20分鐘,。42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中靜置2分鐘,。加入700 μl LB，37℃,，200 rpm復(fù)蘇30分鐘,，涂板。

2. 感受態(tài)細(xì)胞好在冰中緩慢融化,。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率,，混入目的DNA時應(yīng)輕柔操作,。

3. F- *0快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時效率較高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板,，轉(zhuǎn)化效率下降(因無孵育步驟,，卡那霉素等對菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率,，可按熱激轉(zhuǎn)化操作,，增加孵育步驟。