HB101：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個(gè)月） 

基因型

F- mcrB mrr hsdS20(r_B^- m_B^-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((str^R) glnV44λ^-

產(chǎn)品說明

HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的雜合產(chǎn)物（同時(shí)也是Stbl3的原始菌株）。recA13突變可有效抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組,，降低錯(cuò)誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高,，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液,。hsdS20背景使HB101缺失內(nèi)切酶系統(tǒng)，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量,；此菌株具有鏈霉素抗性,；不存在lacI^qZΔM15，不可用于藍(lán),、白斑篩選,。HB101感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>5×10⁸cfu/μg DNA,。 

操作方法

1. HB101感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化,，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘,。

2. 42℃水浴熱激45秒,，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率,。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘,。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng),。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞好在冰中緩慢融化,，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng),，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率,。

2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作,。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。