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套管給藥實驗操作方法
閱讀：1182 發(fā)布時間：2021-8-6在腦科學基礎研究領域中,，顱腦給藥已經(jīng)成為大多數(shù)動物實驗的重要環(huán)節(jié)。根據(jù)實驗設計,，常見有三種給藥方式：單次注射給藥、多次反復給藥和持續(xù)釋放給藥,。前者通常采用立體定位儀配合微量注射泵給藥，第二種通常采用套管給藥,，第三種通常通過植入式緩釋泵給藥,。
本文主要介紹套管給藥,，它主要用于給小鼠、大鼠,、猴等實驗動物的目標腦區(qū)進行反復多次給藥，也可結合配套光纖使用（光遺傳），在給藥的同時或者給藥后繼續(xù)對目標腦區(qū)進行光刺激,。常應用于人類神經(jīng)性疾病動物模型、高級腦功能,、情感、認知等相關研究,。
1.儀器設備與配件
腦立體定位儀、顯微鏡,、冷光源、保溫墊,、手術墊,、套管夾持器,、手術器械包、酒精棉球,、干棉球、顱鉆（包括鉆頭）,、異氟烷氣體麻醉系統(tǒng)（或注射麻醉藥品）,、套管給藥系統(tǒng)（導管,、注射內(nèi)管、導管帽,、PE管、小螺釘）,、微量給藥系統(tǒng)（微量注射泵、微量注射器）
大小鼠剃毛器（非必須,，可手術剪去毛）,、快速滅菌器（主要用于手術器械消毒,，避免引起小鼠顱內(nèi)炎癥）,、顱骨水平校準器（非必須,，主要降低實驗上手操作難度）、顱鉆夾持器（非必須,，可手持顱鉆鉆孔替代）
2.試劑
碘伏,、酒精,、雙氧水,、生理鹽水、牙科水泥（牙托水和牙托粉）,、抗生素,、異氟烷（或注射用麻醉藥物）
3.操作步驟
1根據(jù)腦圖譜或文獻確定目標腦區(qū)的三維坐標：AP 值（Anterior-Posterior,，Y 軸，頭部到尾部）,、ML 值（Medial-Lateral，X 軸,，中縫到兩側）和 DV 值（Dorsal Ventral，Z 軸,，背側到腹側）,。
2將動物麻醉,，頭部固定到腦立體定位儀上（小鼠需要黑色適配器,，大鼠無需適配器，直接固定即可）,。調(diào)平顱骨，而后定位至目標腦區(qū)利用顱鉆鉆孔（同時在孔位附近鉆 2-3 個小孔,，用于旋入顱釘,，作為牙科水泥著力點，防止牙科水泥脫落,。同時這些小孔直徑需要小于顱釘,，這樣顱釘才能旋緊,，起到提供附著力效果），然后用針輕微刺破目標腦區(qū)上方孔德硬腦膜,，暴露顱腦；顱釘固定位置硬腦膜無需刺破,。將顱釘旋入孔內(nèi)約三圈，然后將準備好的導管,，通過夾持器緩慢植入顱內(nèi),，再用牙科水泥將螺絲和導管包裹固定,。
3等待牙科水泥凝固后（約 15 分鐘左右），移除夾持器（注意不要帶動導管）,，并且緩慢插入導管帽，旋緊,；根據(jù)實際情況判斷是否需要縫合皮膚。
4動物恢復期,，約 2-3 天即可恢復,。在此期間,，可在皮膚周圍涂抹羅紅霉素軟膏，防止動物發(fā)炎感染,；同時注意動物狀態(tài)，適時腹腔注射補充糖鹽,，使得動物獲得足夠多能量,。
5將注射內(nèi)管,、PE 管,、鎖緊螺帽,、注射器提前組裝好。利用注射泵吸取藥物,，在PE管上標注藥液位置（主要用于注射藥物過程中觀察藥物液面是否下降了）,。隨后取出導管帽,，將注射內(nèi)管緩慢插入導管，利用鎖緊螺帽鎖緊,。
6設置注射泵的注射量、注射速度,，開始注射。注射完畢后,，靜止約 10 分鐘,，待藥物被充分擴散,，然后緩慢拔出注射內(nèi)管，重新插入導管帽,，旋緊,。
4.注意事項
1.除金屬導管帽外,，建議對非金屬導管帽、導管,、注射內(nèi)管、導管帽芯,、鎖緊螺帽和 PE 管均可以采用高壓蒸汽、紫外,、環(huán)氧乙烷等方式進行消毒滅菌。
2.使用 PE 管前,，可以用大頭針將 PE 管的一端接頭撐大一點或者用酒精泡一小會,，便于插入注射內(nèi)管。插入注射內(nèi)管時,，務必注意的是，PE 管必須套在白色層外層（非金屬管外層）,，否則易脫落、松動,，導致漏液；
3.因 PE 管,、注射內(nèi)管內(nèi)部存在死體積，因此在將注射內(nèi)管,、PE 管、鎖緊螺帽,、注射器組裝好以后,，插入導管前,，應將注射液（比如藥物）將 PE 管和注射內(nèi)管充滿，勿出現(xiàn)氣泡,，以保證注射藥量的精準。操作方法：需要先向前推注射器,，直至注射內(nèi)管前端有液體冒出，才可將注射內(nèi)針插入導管,，注射藥物。
5.套管選擇
（1）單管
訂貨時,，務必提前確認以下 4 個參數(shù)：
1）D-導管的外徑,，有 0.64、0.56,、0.48,、0.41 和 0.71 mm 五種規(guī)格供選擇,。
2）C-導管塑料基座 （B） 基座以下金屬管的長度，即動物顱骨表面至目標腦區(qū)的垂直距離（單位：mm）,。
3）G1-注射內(nèi)管插入導管后突出部分的長度（單位：mm），一般選擇 0.5 或者 1.0 mm,。
4）G2-導管帽插入導管后突出部分的長度（單位：mm），一般選擇 0 ,、0.5 或者 1.0 mm。
（2）雙管
訂貨時,，務必提前確認以下 5 個參數(shù)：
1）D-導管的外徑,，有 0.64、0.48 和 0.41 mm 三種規(guī)格供選擇,。
2）C-導管塑料基座 （B） 下金屬管的長度,，即動物顱骨表面至目標腦區(qū)的垂直距離（單位：mm）。
3）G1-注射內(nèi)管插入導管后突出部分的長度（單位：mm）,，一般選擇 0.5 或者 1.0 mm。
4）G2-導管帽插入導管后突出部分的長度（單位：mm）,，一般選擇 0.5 或者 1.0 mm。
5）C.C-雙導管的中心間距,，即兩個目標腦區(qū)的水平間距（單位：mm）,。