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操作步驟:

1）使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
7）每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8）取出酶標(biāo)板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值,。

試劑和樣本的控制方法：
一,、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照進行，已獲得國家承認(rèn)的“三證",，每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的批號,，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,，不必?fù)?dān)心會有過期的試劑,。我司的試劑，值得您選擇,。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來,，在室溫下放置20-30 min后，再進行測定,，使試劑盒在使用前與室溫平衡,，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足后面的測定需求,。
二,、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補體,、高濃度的非特異免疫球蛋白,、異嗜性抗體、某些自身抗體等,；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG,；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時,，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解,；
補體的控制方法：
①用EDTA稀釋標(biāo)本；
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活,；
2.外源性干擾因素：包括標(biāo)本溶血,、細(xì)菌污染、保存時間過長或凝固不全等,；
控制方法：采血時規(guī)范操作,，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血,；收集標(biāo)本時采用無菌試管,，經(jīng)檢測后再低溫凍存；保存時間不宜過久,，檢測時盡量采用新鮮標(biāo)本；對于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,，并放入37℃水中1 h,，待充分凝固后再離心分離血清。

具有如下優(yōu)點：
一、高效,、靈敏,、特異的抗體；
二,、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性,；
三、吸附性能好,，空白值低,，孔底透明度高的固相載體；
四,、適用血清,、血漿、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標(biāo)本類型；
五,、性價比非常好,，節(jié)省實驗經(jīng)費。

advancedoxidationproteinproducts,AOPPELISAKit人晚期蛋白產(chǎn)物CAS:380929進口,、國產(chǎn)規(guī)格：15mg

isletamyloidpolypeptide,IAPPELISAKit人胰島淀粉樣多肽CAS:8469進口,、國產(chǎn)規(guī)格：200mg

glycosylatedserumprotein,GSPELISAKit人糖蛋白CAS:28486進口、國產(chǎn)規(guī)格：25mg

GlycatedAlbumin,GAELISAKit人糖白蛋白CAS:29586進口,、國產(chǎn)規(guī)格：25mg

Thyroxine-BindingGlobulinAssay,TBGELISAKit人狀腺結(jié)合球蛋白CAS:939555進口,、國產(chǎn)規(guī)格：25mg

advancedglycationendproducts,AGEsELISAKit人晚期糖基終末產(chǎn)物CAS:546439進口、國產(chǎn)規(guī)格：25mg

C-Polypeptide,CPELISAKit人C多肽CAS:7738719進口,、國產(chǎn)規(guī)格：25mg

Receptorforadvancedglycationendproducts,RAGE/AGERELISAKit人晚期糖基終末產(chǎn)物受體CAS:1247509進口,、國產(chǎn)規(guī)格：250mg

Glucagon,GCELISAKit人胰高血糖素CAS:753305進口、國產(chǎn)規(guī)格：125mg

PancreaticPolypeptide,PPELISAKit人胰多肽CAS:775179進口,、國產(chǎn)規(guī)格：20mg

insulinautoantibodies,IAAELISAKit人胰島素自身抗體CAS:278334進口,、國產(chǎn)規(guī)格：125mg

glutamicaciddecarboxylase,GADELISAKit人谷氨脫羧酶CAS:34546進口、國產(chǎn)規(guī)格：20mg

Thymopentin,TPELISAKit人胸腺五肽CAS:821867進口,、國產(chǎn)規(guī)格：100mg

ThymosinELISAKit人胸腺肽CAS:進口,、國產(chǎn)規(guī)格：25mg

Non-PhosphorylatedInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1ELISAKit人未類胰島素生長子結(jié)合蛋白CAS:進口、國產(chǎn)規(guī)格：1ml
MCP-3 elisa試劑盒異橙皮內(nèi)酯DiI iodide [1,1‘-Dioctadecyl-3,3,3’,3‘- tetramethylindocarbocyanine iodide] VB12結(jié)合珠蛋白,；觸珠蛋白檢測試盒

異莪術(shù)呋喃二DiI perchlorate [1,1’-Dioctadecyl-3,3,3‘,3’-tetramethylindocarbocyanine perchlorate] LZM維生素B12檢測試盒

異戈米辛 ODiI triflate [1,1‘-Dioctadecyl-3,3,3’,3‘-tetramethylindocarbocyanine triflate] Beclin1溶菌酶檢測試盒

異漢防己素Nile Red   LC3IIBeclin1檢測試盒

異姜花素DR 6 [Rhodamine B, hexyl ester, perchlorate]  p62微管相關(guān)蛋白輕鏈3II檢測試盒

異柯楠TMRE [Tetramethylrhodamine ethyl ester]  Lipasep62檢測試盒

測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,，不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱,。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起,。
3.為避免蒸發(fā),，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中,。
4.加入底物后,，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃,，ELISA板可避光放在實驗臺上,，以便 不時觀察，待對照管顯色適當(dāng)時,，即可終止酶反應(yīng),。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵,。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色,。
2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果,，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法,。