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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
大片吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸,，-20℃保存，有效期一年,。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí),，由于其濃度較高,，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作,。
詳細(xì)介紹
大片吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Fasciola giganticaPCR |
貨號(hào) | YS30758-R |
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,；
④靶基因的特異性與保守性,。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽(yáng)性對(duì)照：有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
（2）陰性對(duì)照：Ct值＞38或無(wú)Ct值,，線形為直線或輕微斜線,，無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定：
（1）陽(yáng)性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。
（2）可疑：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi),，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,，則判定為陽(yáng)性,，否則為陰性,。
（3）陰性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值＞38或無(wú)Ct值。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火,；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈,；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短,；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸,，合成DNA的新互補(bǔ)鏈,。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無(wú)到有，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,。可以是DNA也可以是RNA,，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM
5．Taq酶
二,、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次,，后在72℃ 保溫7min,。
3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三,、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室,。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響,。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果,，純化的方法越簡(jiǎn)單越好,。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套,。
下列是公司正在*的產(chǎn)品：
Chicken Mouse IgG H&L原裝,、分裝傳染病抗原
Donkey Mouse IgG H&L原裝、分裝尿香草扁桃（VMA）ELISA檢測(cè)試盒
Goat Mouse IgG H&L原裝,、分裝人脂蛋白脂酶(LPL)elisa檢測(cè)試盒
Rabbit Mouse IgG H&L原裝,、分裝胰高血糖素樣肽（GLP-1）ELISA試盒
Sheep Mouse IgG H&L原裝、分裝胃抑素(GIP)ELISA試盒
Chicken Human IgG H&L原裝,、分裝可溶性淀粉樣前體蛋白α（sAPPα）試盒
Goat Human IgG H&L原裝,、分裝脂蛋白a[Lp（a）]ELISA 檢測(cè)試盒
Rabbit Human IgG H&L原裝、分裝立克次體ELISA系列檢測(cè)試盒
Goat Rabbit IgG H&L (FITC)原裝,、分裝人間皮瘤標(biāo)志物/間皮素ELISA試盒BRD3 antibody [2088C3a]原裝,、分裝α-環(huán)糊精
BBX antibody [2065C12a]原裝、分裝α-環(huán)糊精
Rex1 antibody原裝,、分裝α-環(huán)糊精
MSI2 antibody原裝,、分裝黃嘌呤氧化酶(XOD)
Hex antibody [HHE5I261]原裝、分裝?；?L-氨基?；?/span>
HIP2/LIG antibody [757C3a]原裝、分裝?；?L-氨基?；?/span>
Mitofusin 2 antibody原裝、分裝胰蛋白酶1:250
HOXC9 antibody [HOXCA6E6]原裝,、分裝胰蛋白酶1:250
Adenovirus antibody [10/5.1.2]原裝,、分裝胰蛋白酶1:2500
大片吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)THOC5 antibody原裝、分裝氟化鈉(>97%,BR)
DNA Polymerase Kappa/POLK antibody原裝,、分裝月桂鈉(>95%,BR)
MYCBP2 antibody原裝,、分裝偏鋁鈉(分子生物學(xué)級(jí))
CCDC124 antibody原裝,、分裝偏重亞鈉(>96%，BC)
CD45RO antibody [UCHL-1]原裝,、分裝偏硼鈉四水(>99%,BR)
Peroxiredoxin 5 antibody原裝,、分裝偏釩鈉二水(>98%,BC)
DRIM antibody原裝、分裝醇鈉(>97%,BR)
LARG antibody原裝,、分裝正辛鈉(>98%,BR)
Recombinant Human Cellubrevin protein原裝,、分裝正辛鈉(>98%,BR)