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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
豬瘟病毒野生株P(guān)CR檢測(cè)試劑盒說明書運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，有效期一年,。使用本試劑盒提供的陽性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高,，一定要注意不要污染其他試劑和成分,。在專門的區(qū)域操作。
詳細(xì)介紹
豬瘟病毒野生株P(guān)CR檢測(cè)試劑盒說明書原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍,，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Classical Swine Fever VirusWT(CSFVWT)RTPCR |
貨號(hào) | YS30581-R |
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,；
②堿基配對(duì)原則,；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性,。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對(duì)照：有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35,。
（2）陰性對(duì)照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線,，無指數(shù)增長(zhǎng)期,。
2.標(biāo)本結(jié)果判定：
（1）陽性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。
（2）可疑：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi),。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,，則判定為陽性,，否則為陰性。
（3）陰性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值＞38或無Ct值,。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板,；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),，通過多次循環(huán)反應(yīng),，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈,；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短,；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸,，合成DNA的新互補(bǔ)鏈,。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無到有，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,。可以是DNA也可以是RNA,，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM
5．Taq酶
二,、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次,，后在72℃ 保溫7min,。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室,。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響,。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果,，純化的方法越簡(jiǎn)單越好,。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套,。
下列是公司正在*的產(chǎn)品：
CD68 antibody [PG-M1]原裝,、分裝HiTrap TALON Crude
MelanA antibody [A103]原裝、分裝His SpinTrap TALON
Melanoma gp100 antibody [HMB45]原裝,、分裝His GravTrap TALON
Rab2 antibody原裝,、分裝支原體檢測(cè)試盒
NCF1/p47-phox antibody原裝、分裝MP Biomedicals 試
Fyn antibody原裝,、分裝脈沖場(chǎng)凝膠電泳
PRAM1 antibody原裝,、分裝支原體檢測(cè)試盒
ATF2 antibody原裝、分裝支原體去除試
RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS antibody [8WG16] - ChIP Grade原裝,、分裝玻璃奶試盒Human Integrin beta 4 (phospho Y1526) peptide原裝,、分裝聚酰胺粉(柱層析用，200-400目)
Meprin beta antibody原裝,、分裝聚酰胺粉(柱層析用，10-30目)
Human Src peptide原裝,、分裝二鈉,二水(for HPLC, ≥99%(T))
Nitro tyrosine antibody原裝,、分裝高氯鈉，一水(色譜級(jí),≥99.0%(T))
Carcino Embryonic Antigen CEA antibody [CB30] (Phycoerythrin)原裝,、分裝無水鈉(農(nóng)殘級(jí))
EG-VEGF antibody原裝,、分裝無水鈉(農(nóng)殘級(jí))
PROKR2 antibody原裝、分裝無水鈉(for HPLC,≥99.0%(T))
VEZT antibody原裝,、分裝無水鈉(for HPLC,≥99.0%(T))
Cofilin antibody原裝,、分裝碳鈉(for HPLC,≥99.0%)
豬瘟病毒野生株P(guān)CR檢測(cè)試劑盒說明書Neprilysin-2 antibody原裝、分裝IELLQAR (8 – b分支 MAPS)選擇素結(jié)合肽
MYO18A antibody原裝,、分裝胰島素樣生長(zhǎng)子-I（1-3）
MYO18A antibody原裝,、分裝胰島素樣生長(zhǎng)子-I（24-41）
SPO11 antibody原裝、分裝胰島素樣生長(zhǎng)子-I（30-41）
Native Sheep COX2 / Cyclooxygenase 2 protein原裝,、分裝胰島素樣生長(zhǎng)子-I類似物
Native Human Cytomegalovirus AD169 protein原裝,、分裝胰島素樣生長(zhǎng)子-Ⅱ（33-40）
Native Human Cytomegalovirus AD169 protein原裝、分裝白介素-1受體肽段,，人
Native Human Carcino Embryonic Antigen CEA protein原裝,、分裝白介素-1a（223-250），人
C1s antibody [M81]原裝、分裝白介素-1b（178-207）,，人