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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
艱難梭狀芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存,，有效期一年,。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高,，一定要注意不要污染其他試劑和成分,。在專門的區(qū)域操作。
詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)過程：
一,、艱難梭狀芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有,，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA,，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二,、操作步驟
1．在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三,、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行,。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響,。一般而言,，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好,。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染,。操作過程中均應(yīng)戴手套。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Clostridium difficilePCR |
貨號(hào) | YS30585-R |
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍,，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則,；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,；
④靶基因的特異性與保守性。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽(yáng)性對(duì)照：有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35,。
（2）陰性對(duì)照：Ct值＞38或無Ct值,，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長(zhǎng)期,。
2.標(biāo)本結(jié)果判定：
（1）陽(yáng)性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,。
（2）可疑：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi),。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi),，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,，則判定為陽(yáng)性，否則為陰性,。
（3）陰性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值＞38或無Ct值,。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火,；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增,。
其主要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈,；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短,；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈,。
下列是公司正在*的產(chǎn)品：
Cytokeratin 20 antibody [Ks20.8], prediluted原裝,、分裝醋鑭/碳鑭/鑭
Trypsin Antigen Retrieval Solution原裝、分裝2,6-二叔基對(duì)酚
Heat Mediated High pH Antigen Retrieving Solution原裝,、分裝洛伐他汀
10x Heat Mediated Antigen Retrieval Solution pH 6.0原裝,、分裝麥芽浸膏
E2 tag antibody [5E11]原裝、分裝2-溴-2-基-1,3-二醇/溴醇
E2 tag antibody [3F12]原裝,、分裝賴氨脫羧酶培養(yǎng)基
Bovine Papilloma Virus E2 antibody [1E4]原裝,、分裝烯醇單環(huán)己銨鹽/PEP
Insulin Receptor beta antibody [18-44]原裝、分裝木聚糖/木糖膠/木膠/半纖維素
Cdc25A antibody原裝,、分裝葡聚糖凝膠G-10Recombinant Cytomegalovirus pp65 protein原裝,、分裝異(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC))
Recombinant Cytomegalovirus UL80a protein原裝、分裝基反亞油酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品)
Recombinant Cytomegalovirus ICP36 protein原裝,、分裝肉豆蔻酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))
Recombinant HSV1 gD protein原裝,、分裝肉豆蔻酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))
Recombinant HSV2 gD protein原裝、分裝三聚胺(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(HPLC))
Recombinant HSV2 gG Envelope protein原裝,、分裝三聚胺(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(HPLC))
Recombinant HSV1 gG Envelope Protein原裝,、分裝棕櫚酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC))
Recombinant VZV gE protein原裝、分裝棕櫚酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC))
Recombinant VZV ORF9 protein原裝,、分裝棕櫚酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC))
艱難梭狀芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書Recombinant Human NFIC/CTF protein (399-499aa)原裝,、分裝白介素-1β轉(zhuǎn)化酶底物
Recombinant Human PPAR delta protein原裝、分裝白介素-6受體（局部）
Recombinant Human PPAR gamma protein原裝、分裝中間葉激素,，人
UQCRFS1/RISP antibody原裝,、分裝中間葉激素,，大鼠
Recombinant Human KAT13A / SRC1 protein原裝,、分裝中間葉激素-53，人
FOXI3 antibody原裝,、分裝無脊椎動(dòng)物速激肽-I,，OctTK - I
Puma gamma/GPR109A antibody原裝、分裝三肌醇R導(dǎo)出肽
Recombinant Human VP16 protein原裝,、分裝IRL-1038
Recombinant Human RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS protein原裝,、分裝IRL-1720