詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
結腸組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X7177 |
細胞簡介:
小鼠結腸平滑肌分離自結腸組織,;結腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,,在第3骶椎平面連接直腸,。結腸分升結腸、橫結腸,、降結腸和乙狀結腸4部分,,大部分固定于腹后壁,結腸的排列酷似英文字母“M",,將小腸包圍在內(nèi),。結腸橫切面由內(nèi)到外依次為:黏膜(上皮層、固有層,、黏膜肌層),,黏膜下層(疏松結締組織),肌層(內(nèi)環(huán)形,、外縱行兩層平滑?。?,外膜(纖維膜或漿膜)。結腸平滑肌細胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內(nèi)環(huán)形,、外縱行平滑?。唤Y腸運動少而緩慢,,對刺激的反應也較遲緩,。結腸平滑肌在食物消化與吸收、腸道運動和物質(zhì)分泌,、誘發(fā)全身炎癥反應以及細胞內(nèi)信號轉導途徑等研究中起著重要的作用,。結腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細胞貼壁伸展,,細胞形態(tài)大小不一,,呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,,核卵圓形、居中,;2周后細胞匯合,,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,,有分枝狀突起,,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏,;細胞密度低時,,常交織成網(wǎng)狀;密度高時,,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,,4-6天即可匯合,,并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。結腸平滑肌運動活性受到神經(jīng)遞質(zhì),、胃腸激素和藥物等因素的調(diào)節(jié),。隨著現(xiàn)代胃腸動力學研究的進展,對胃腸運動的研究已從器官,、組織水平發(fā)展到細胞,、分子水平,要求在胃腸道單個平滑肌細胞標本上來完成各種電生理,、藥理和分子生物學等實驗,。體外培養(yǎng)細胞,,由于影響因素單一,是研究細胞功能以及相應的細胞信號轉導機制的基礎,。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠結腸平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠結腸平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,,如白血病細胞、淋巴細胞,、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
抑癌蛋白DKK3 英文名稱: Dikkopf 3 規(guī)格: 英文縮寫: DKK3
脫氫血栓素B2 英文名稱: Human 11 dehydro Thromboxane B211 規(guī)格: 英文縮寫: 11-DH-TXB2
2,3二0酸甘油酸 英文名稱: Human 2,3 Diphosphoglycerate 規(guī)格: 英文縮寫: 2,3-DPG
D二聚體 英文名稱: Human D. Dimer 規(guī)格: 英文縮寫: D.D
魚補體3(C3)試劑盒
Human aidiuretic hormone / vasopressin / arginine vasopressin (ADH/VP/AVP) ELISA Kit 人抗利尿激素/血管加壓素/精加壓素(ADH/VP/AVP)試劑盒
HumanVitaminA,VAELISAKit 人A(VA)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforADH/VP/AVP(Mouseaidiuretichormone/vasopressin/argininevasopressin)ELISAKit小鼠抗利尿激素/血管加壓素/精加壓素
血液乙酰酯酶活性熒光法定量試劑盒20次
Mousereducedglathione,GSHELISAKit小鼠還原型(GSH)試劑盒
BHLHE41單克隆抗體
19號染色體開放閱讀框71抗體
GLIPR1重組小鼠 GLIPR1 / RTVP1 蛋白 (His 標簽) Protein
基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)重組蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 10 (MMP10)
S100A4重組人 S100A4 蛋白 (His 標簽) Protein
CA3 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase III / CA3 蛋白 (His 標簽)
GFRA1 Protein Canine 重組狗 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白 (His 標簽)
基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)重組蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 10 (MMP10)
CA3 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase III / CA3 蛋白 (His 標簽)
GLIPR1重組小鼠 GLIPR1 / RTVP1 蛋白 (His 標簽) Protein
GFRA1 Protein Canine 重組狗 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白 (His 標簽)
S100A4重組人 S100A4 蛋白 (His 標簽) Protein
小鼠結腸平滑肌細胞大鼠高密度脂蛋白3(HDL3)試劑盒 ,,英文名: HDL3 ELISA Kit
Rabbit esadiol (E2) ELISA Kit 兔子雌二醇(E2)試劑盒
C組輪狀病毒(HRV-C)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
CLIAKitforMHCELISAKit魚類主要組織相容性復合體
體液尿酸含量酶偶聯(lián)比色法定量試劑盒20次
ELISAKitCS牛檸檬酸合成酶
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,,漂浮,;
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應將原代細胞換液,;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞,;
2,、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行,;
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗,;
4,、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行