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產品名稱：小鼠結腸成纖維細胞

組織來源：結腸

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS,、bFGF,、Insulin、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2,，5%

小鼠結腸成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。

細胞簡介：

小鼠結腸成纖維分離自結腸組織；結腸在右髂窩內續(xù)于盲腸,，在第3骶椎平面連接直腸,。結腸分升結腸、橫結腸,、降結腸和乙狀結腸4部分,，大部分固定于腹后壁，結腸的排列酷似英文字母“M",，將小腸包圍在內,。結腸橫切面由內到外依次為：黏膜（上皮層、固有層,、黏膜肌層）,，黏膜下層（疏松結締組織），肌層（內環(huán)形,、外縱行兩層平滑?。饽ぃɡw維膜或漿膜）,。結腸成纖維細胞主要分布于外膜（纖維膜或漿膜）結締組織內,。成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的結腸成纖維細胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起,；6h后細胞基本貼壁,，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長,，不聚集成團；細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長,，平坦,、胞體較大，細胞質透明,，細胞核較大,，呈橢圓形，顏色淡,。細胞融合,，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。

方法簡介：

實驗室分離的小鼠結腸成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的小鼠結腸成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

b）、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式,，棄半數培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
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收到細胞如何處理？

1,、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現象,。若有，請拍照,，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）,。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3,、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子、傳代比例,、換液頻率等,。

4、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài),。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代,；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松,。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時,，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作