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詳細(xì)介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
眼角膜組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | YS-01X7543 |
細(xì)胞簡介：
小鼠角膜內(nèi)皮分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜,，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形,，從前面看為橫橢圓形,。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄,。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢,，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛,。為了保持透明,，角膜并沒有血管，透過外界空氣,、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣,。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層,、前彈力層,、基質(zhì)層,、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層,。角膜的高度透明性和光學(xué)性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一,，而角膜內(nèi)皮細(xì)胞（CEC）在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內(nèi)皮細(xì)胞是角膜內(nèi)層的單層細(xì)胞,，構(gòu)成了后彈力層和房水之間的物理屏障,，通過離子“泵"功能調(diào)節(jié)角膜中離子濃度和水分，維持角膜的半脫水狀態(tài),，保證角膜的正常厚度和透明度,。一旦角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能出現(xiàn)紊亂，常導(dǎo)致角膜水腫而使角膜部分甚至失去透明性,。角膜內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能,；②角膜內(nèi)皮細(xì)胞對角膜透明性有重要作用,；③角膜內(nèi)皮細(xì)胞通過Na+-K+-ATP酶活性，維持角膜和房水內(nèi)Na+梯度,，防止水分滲入角膜內(nèi),，維持角膜實質(zhì)層相對脫水狀態(tài)，維持透明性,。
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠角膜內(nèi)皮采用混合膠原酶消化結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的小鼠角膜內(nèi)皮經(jīng)NSE（神經(jīng)元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞傳代及凍存：
| 細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
| 如果細(xì)胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例,； 1．細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存,。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng),，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,，可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
乙脫氫酶（ALDH）試劑盒 紫外分光光度法 50管/48樣
輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
NADP0酸酶（NADPase）測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
6-0酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
鴨子免疫球蛋白G(IgG)ELISA 試劑盒
Human ininsic factor aibody (IFA) ELISA Kit 人抗內(nèi)因子抗體(IFA)試劑盒
HumanmajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/HLA-ⅡELISAKit 人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforADA(Humanadenosinedeaminase)ELISAKit人腺苷脫氨酶
血液總酶連續(xù)循環(huán)熒光定量試劑盒20次
MouseProstaticAcidPhosphatase,PAPELISAKit小鼠前列腺酸性0酸酶(PAP)試劑盒
APC標(biāo)記人CD79b單克隆抗體
組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶B蛋白4抗體
OPCML重組人 OBCAM / OPCML 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
微粒體S轉(zhuǎn)移酶1(MGST1)重組蛋白 Recombinant Microsomal Glutathione S Transferase 1 (MGST1)
KIRREL重組人 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
CADM1 Protein Human 重組人 SynCam / CADM1 / TSLC1 / IGSF4 蛋白 (His 標(biāo)簽)
HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Hong Kong/483/97) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽)
微粒體S轉(zhuǎn)移酶1(MGST1)重組蛋白 Recombinant Microsomal Glutathione S Transferase 1 (MGST1)
CADM1 Protein Human 重組人 SynCam / CADM1 / TSLC1 / IGSF4 蛋白 (His 標(biāo)簽)
OPCML重組人 OBCAM / OPCML 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Hong Kong/483/97) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽)
KIRREL重組人 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
小鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)試劑盒 ，英文名： HMGB-1 ELISA Kit
Rabbit compleme fragme 3A (C3a) ELISA Kit 兔子補體片斷3a(C3a)試劑盒
空腸彎曲菌(CJ)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
CLIAKitforMHC-II/H-2II(Mousemajorhistocompatibilitycomplex-II)ELISAKit小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類
體液內(nèi)毒素濁度法定量試劑盒20次
ELISAKitEPI牛
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性,；
2,、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L,；
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂??；
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,，應(yīng)將原代細(xì)胞換液,；
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞,；
2,、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行,；
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進行分瓶試驗,；
4,、長期培養(yǎng)時，淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,，以利細(xì)胞生長；
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時才能進行
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