小鼠骨髓樹突狀細胞(成熟DC細胞)

商品屬性：

細胞簡介：

小鼠骨髓樹突狀分離自骨髓,；骨髓是機體的造血組織，位于身體的許多骨骼內,。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓,。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞,。血小板有止血作用,，白細胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細菌,、病毒等,；某些淋巴細胞能制造抗體,。因此，骨髓不但是造血器官,，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質間的網眼中,，是一種海綿狀的組織,，能產生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓,。出生時,，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大,，脂肪細胞增多,，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓DC細胞是由骨髓單核細胞誘導而成的,；樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞，典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,，在GM-CSF,、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細胞大而形態(tài)不規(guī)則,，表面皺褶多,，亦可見少量短刺狀突，胞內細胞器豐富并可見吞噬泡,，具有較強的遷移能力,，伴隨有部分未誘導成的單核細胞，貼壁形態(tài)多樣,。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經TNFα,、LPS等誘導而成，多數呈懸浮生長,， 細胞呈圓形,，細胞體積進一步增大，表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),，伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞,。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志,，主要通過形態(tài)學,、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80,、CD86等共刺激分子,，進而激活T淋巴細胞，誘導免疫應答,，處于啟動、調控,、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié),；未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化,、增殖產生免疫應答,，不能激活T細胞的信號，可導致T細胞無能,，從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受,。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86,、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,，一般在30%以下。

方法簡介：

實驗室分離的小鼠骨髓成熟DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞,、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的小鼠骨髓樹突狀(成熟DC細胞)經CD86免疫熒光鑒定,、細 胞 形態(tài)等綜合鑒定,，純度可達80%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：半貼壁半懸浮

細胞形態(tài)：圓形,，樹突狀

傳代特性：屬于高度分化細胞,；屬于不增殖細胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

小鼠骨髓樹突狀細胞(成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。

　?、?消化培養(yǎng)法

　　③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞,，如白血病細胞,、淋巴細胞、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng),，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,，可用于重點觀察細胞間的聯系,、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用,。

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原代細胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1,、細胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性；

　　2,、細胞接種時濃度要稍大一些,，至少為5×108細胞/L；

　　3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5,、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩,，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,，漂浮；

　　7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,，應將原代細胞換液；

　　8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時,，應將細胞懸液經低速離心后換液。

　　二,、懸浮細胞培養(yǎng)

　　1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；

　　2,、短期培養(yǎng),，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；

　　3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,，進行分瓶試驗；

　　4,、長期培養(yǎng)時,，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清,，以利細胞生長,；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；

　　6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行