詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
肝臟組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細胞樣 | YS-01X7161 |
細胞簡介:
小鼠肝竇內(nèi)皮細胞分離自肝臟組織;肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官,,并在身體里面起著去氧化,、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用,;肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁,。肝臟是機體內(nèi)臟里最大的器官,位于機體中的腹部位置,,在右側(cè)橫隔膜之下,,位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,胃的上方,。肝臟是機體消化系統(tǒng)中最大的消化腺,,為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官,,又是新陳代謝的重要器官,。肝臟在機體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu):肝臟位于右上腹,隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,,大部分肝為肋弓所復(fù)蓋,,僅在腹上區(qū),、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,肝上面則與膈及腹前壁相接,。肝竇內(nèi)皮細胞(SEC)是肝臟內(nèi)所占比例最高的非實質(zhì)細胞,,位于肝竇腔與肝細胞之間,具有物質(zhì)轉(zhuǎn)運,、吞噬,、抗原提呈、免疫耐受等功能,。SEC由于擁有一般細胞所沒有的窗孔結(jié)構(gòu),、細胞間連結(jié)松散、內(nèi)皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性,,從而達到快速交換各種大小分子的目的,。肝在遭到多種病原侵襲時,肝竇內(nèi)皮細胞窗孔逐漸減少或消失,,內(nèi)皮下基膜形成,,產(chǎn)生類似于連續(xù)型毛細血管的結(jié)構(gòu),這一過程稱為肝竇毛細血管化,。它由多種因素引起,,其過程極復(fù)雜,在多種肝病的發(fā)病前期階段均有出現(xiàn),,近年來受到廣泛關(guān)注,。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠肝竇內(nèi)皮采用混合酶灌流消化、反復(fù)低速離心,、密度梯度離心法,,并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠肝竇內(nèi)皮經(jīng)CD31,、CD14免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml),,明膠(0.1%)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例,; 1.細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,,如白血病細胞、淋巴細胞,、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
總蛋白定量測定試劑盒(帶標準:BCA法)(比色法)
總超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒(WST-1法)
乳酸(lacticacid)測定試劑盒(測血清,、組織等)(比色法)
羥脯酸(Hyp)測定試劑盒(堿水解法)(測動物血清、組織,、尿液)
豬孕酮(PROG)試劑盒
Human erythrocyte membrane protein (EMP) ELISA Kit 人紅細胞膜蛋白(EMP)試劑盒
RabbitComplemefragme3a,C3aELISAKit 兔子補體片斷3a(C3a)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforAPF(Humanai-perinuclearfactor)ELISAKit人抗核周因子抗體
血清鈣比色法定量試劑盒50次
PorcineIerleukin6,IL-6ELISAKit豬白介素6(IL-6)試劑盒
SBNO2蛋白抗體
胸苷激酶2抗體
IL1B重組食蟹猴 IL-1 beta / IL1B 蛋白 Protein
MMP-9(matrix metalloproteinase 9 0.5mgMMP-9(matrix metalloproteinase 9) 基質(zhì)金屬蛋白酶-9(抗原)
WFDC2重組人 WAP5 / WFDC2 / HE4 蛋白 (His 標簽) Protein
BTK Protein Human 重組人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 蛋白 (His 標簽)
HGF Protein Mouse 重組小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白 (His 標簽)
泛素激活酶樣蛋白(UBE1L)重組蛋白 Recombinant Ubiquitin Activating Enzyme E1 Like Protein (UBE1L)
BTK Protein Human 重組人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 蛋白 (His 標簽)
NXPH1重組小鼠 Neurexophilin-1 / NXPH1 蛋白 (His 標簽) Protein
IGFBP2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP2 蛋白 (His 標簽)
PFN2重組人 Profilin 2 / PFN2 蛋白 (His 標簽) Protein
小鼠肝竇內(nèi)皮細胞大鼠果糖胺(FRA)試劑盒 ,,英文名: FRA ELISA Kit
Rabbit inducible niic oxide syhase (iNOS) ELISA Kit 兔誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)試劑盒
新型甲型H1N1流感病毒(IAV-H1N1)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
CLIAKitforMMP-8(HumanMaixmetalloproteinase8/Neuophilcollagenase)ELISAkit人基質(zhì)金屬蛋白酶8/粒細胞膠原酶
體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1)活性熒光定量試劑盒20次
ELISAKitTM犬血栓調(diào)節(jié)蛋白
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,,漂?。?/p>
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行,;
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗,;
4,、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,,以利細胞生長;
5,、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快,、細胞密度較高時才能進行