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本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用,,不直接用于食品、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,!
產(chǎn)品名稱:小鼠腸道干細胞
組織來源:腸組織
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 懸浮
細胞形態(tài) 球形
傳代特性 可傳2-3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細胞簡介:
小鼠腸道干分離自腸道組織;腸道指的是從胃幽門至的消化管,。腸是消化管中最長的一段,,也是功能最重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸,、大腸和直腸3大段,。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進行的,大腸主要濃縮食物殘渣,,形成糞便,,再通過直腸經(jīng)排出體外。腸道堪稱身體最勞累的器官——每天不停地消化,、吸收食物,,以提供足夠的養(yǎng)分,其實它的功能還遠不止此——它還是機體內(nèi)最大的微生態(tài)系統(tǒng),。腸道干細胞(ISC)也稱腸道上皮干細胞,,主要位于腸黏膜隱窩內(nèi),其與腸道黏膜上皮的更新和修復密切相關(guān),。正常情況下,,位于隱窩基底部的腸道干細胞不斷向隱窩頂部(腸腔方向)遷移,整個遷移過程大約3-5d,,在遷移過程中腸道干細胞分化形成不同的腸黏膜細胞,。當受到外界生理或病理信號作用時,ISC可持續(xù)增殖,、分化為成熟腸上皮細胞,,如腸型細胞、杯狀細胞,、內(nèi)分泌細胞和潘氏細胞等,,從而維持腸道黏膜結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定性。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠腸道干采用-膠原酶聯(lián)合消化后,用腸道干細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠腸道干經(jīng)MSI-1免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟:
一,、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中),,培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
二,、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
a),、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,,脫落后吸出,,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b),、對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細胞懸起,,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
收到細胞如何處理,?
1,、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,,請拍照,,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
3、仔細閱讀細胞說明書,,了解細胞相關(guān)信息,,如貼壁特性(貼壁/懸浮),、細胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。
4,、靜置完成后,,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢,、拍照,,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,,定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài)。
5,、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,,可正常傳代;若未超過80%,,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,,瓶蓋可稍微擰松,。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),,1200rpm離心5min,,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時,若細胞密度超過80%,,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),,補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作
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