詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
皮膚組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X7510 |
細胞簡介:
小鼠表皮成纖維分離自皮膚組織,;表皮位于動物皮膚的外層,由胚胎時期外胚層形成,,具有抗摩擦和抗損傷的作用,。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu),由復層扁平上皮構(gòu)成,。從基底層到表面可分為五層,,即基底層、棘層,、顆粒層,、透明層和角質(zhì)層,。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,,由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大,,輪廓清楚,,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,,核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質(zhì)嗜弱堿性,,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,,在一定條件下,它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,;成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好,,懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,,表現(xiàn)為小的突起,;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,,胞核清晰,,分布較均勻,散在生長,,不聚集成團,;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),,細胞排列緊密,,有的交叉重疊生長,平坦,、胞體較大,,細胞質(zhì)透明,細胞核較大,,呈橢圓形,,顏色淡。細胞融合,,并彼此連接成網(wǎng)狀,;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠表皮成纖維采用先消化,、后-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠表皮成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3-5代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存,。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,,如白血病細胞、淋巴細胞,、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
亞鹽測定試劑盒(比色法)
唾液酸(SA)測定試劑盒(帶SA標準)(比色法)
小鼠組織因子(TF)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human ai glomerular baseme membrane aibody (GBM) ELISA Kit 人抗腎小球基底膜抗體(GBM)試劑盒
Humanhydroxyproline,HypELISAKit 人羥脯(Hyp)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforACH(Humanacetylcholine)ELISAKit人乙酰
藥品阿斯巴塘(aspaame)含量酶連續(xù)循環(huán)反應比色法定量試劑盒20次
Mousephosphatidylserine,PSELISAKit小鼠0脂酰絲(PS)試劑盒規(guī)格:96T/48T
G蛋白偶聯(lián)受體44抗體
脫碘酶2抗體
IFNA4重組食蟹猴 IFNA4 / IFNα4 / Interferon alpha-4 蛋白 (Fc 標簽) Protein
Melamine/BSA 三聚胺與牛血清白蛋白偶聯(lián)物 1mgMelamine/BSA 三聚胺與牛血清白蛋白偶聯(lián)物
S100A8重組人 S100A8 / CAGA 蛋白 Protein
CARHSP1 Protein Human 重組人 CARHSP1 蛋白
VDR Protein Mouse 重組小鼠 VDR / NR1I1 蛋白
Melamine/BSA 三聚胺與牛血清白蛋白偶聯(lián)物 1mgMelamine/BSA 三聚胺與牛血清白蛋白偶聯(lián)物
CARHSP1 Protein Human 重組人 CARHSP1 蛋白
IFNA4重組食蟹猴 IFNA4 / IFNα4 / Interferon alpha-4 蛋白 (Fc 標簽) Protein
VDR Protein Mouse 重組小鼠 VDR / NR1I1 蛋白
S100A8重組人 S100A8 / CAGA 蛋白 Protein
小鼠表皮成纖維細胞大鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)試劑盒 ,,英文名: COX-2 ELISA Kit
Rabbit ai endothelial cell aibodies (AECA) ELISA Kit 兔抗內(nèi)皮細胞抗體(AECA)試劑盒
登革熱病毒通用型(DFV-U)核酸試劑盒(-PCR法) 48T
CLIAKitformouseIgMELISAkit小鼠免疫球蛋白IgM
體液還原型(GSH)濃度熒光定量試劑盒50次
ELISAKitCⅠCP人Ⅰ型前膠原C末端肽
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,,漂?。?/p>
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應將原代細胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進行分瓶試驗;
4,、長期培養(yǎng)時,,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,,以利細胞生長,;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行