詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
胰腺組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7101 |
細(xì)胞簡介:
人胰腺星狀分離自胰腺組織;胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分,。外分泌腺由腺泡和腺管組成,,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道,。胰液中含有,、原、脂肪酶,、等。胰液通過胰腺管排入十二指腸,,有消化蛋白質(zhì),、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成,,胰島主要由4種細(xì)胞組成:α細(xì)胞,、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞,。α細(xì)胞分泌胰高血糖素,,升高血糖;β細(xì)胞分泌胰島素,,降低血糖,;γ細(xì)胞分泌,以旁分泌的方式抑制α,、β細(xì)胞的分泌,;PP細(xì)胞分泌胰多肽,抑制胃腸運動,、胰液分泌和膽囊收縮,。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征,活化的胰腺星狀細(xì)胞(PSC)是胰腺纖維化的主要效應(yīng)細(xì)胞,,PSC分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提,。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴,并表達(dá)Desmin蛋白,,活化后的PSC則表達(dá)α-平滑肌肌動蛋白(alpha-SMA),。PSC具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種,并分別具有特異的標(biāo)志物,。靜息狀態(tài)PSC胞質(zhì)內(nèi)富含的維生素A脂滴可以被油紅O染成紅色,,陽性表達(dá)Desmin。激活狀態(tài)PSC陽性表達(dá)alpha-SMA,。油紅O染色發(fā)現(xiàn),,原代分離的細(xì)胞培養(yǎng)6d,胞漿中仍可見明顯的脂滴,傳代后,,橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失,。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示,細(xì)胞接種24h仍然表達(dá)Desmin,,48h后Desmin基本不再表達(dá),。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細(xì)胞開始表達(dá)alpha-SMA,隨著培養(yǎng)時間的增長和傳代次數(shù)的增加,,細(xì)胞表達(dá)alpha-SMA,,而不再表達(dá)Desmin,說明細(xì)胞活化,。提示PSC接種24h后即啟動了激活過程,,至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細(xì)胞激活,傳代后細(xì)胞處于高度激活狀態(tài),。原代胰腺星狀細(xì)胞可作為慢性胰腺炎新藥的細(xì)胞篩選模型,,目前研究發(fā)現(xiàn):胰腺受損時,在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細(xì)胞活化,,導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài),、功能發(fā)生變化,促使基質(zhì)增生,、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積,。
方法簡介:
公司實驗室分離的人胰腺星狀采用膠原酶制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的人胰腺星狀經(jīng)α-SMA,、Desmin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)優(yōu)良
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔p53(p53)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔(ADR)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠IgG Fc片段(IgGFcγ)試劑盒 96T/48T
Rat advanced glycation end products (AGEs) ELISA Kit 大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)試劑盒
HumahromboxaneB2,TX-B2ELISAKit 人血栓素B2(TXB2)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanCollagenaseTypeII試劑盒人膠原酶II(CollagenaseII)試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織ABL1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
HumaeceptorⅢfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅢELISAKitGFc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)試劑盒規(guī)格:96T/48T
B7-H4抗體
輔酶Q10B抗體
CLEC6A重組小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白 Protein
CD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原 0.5mgCD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原)
CCDC134重組人 CCDC134 蛋白 Protein
HNMT Protein Human 重組人 HNMT / Histamine N-methyltransferase 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
CD14 Protein Rat 重組大鼠 CD14 蛋白
CD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原 0.5mgCD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原)
HNMT Protein Human 重組人 HNMT / Histamine N-methyltransferase 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
CLEC6A重組小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白 Protein
CD14 Protein Rat 重組大鼠 CD14 蛋白
CCDC134重組人 CCDC134 蛋白 Protein
人胰腺星狀細(xì)胞大鼠輕肽鐵蛋白(FTL)試劑盒 ,,英文名: FTL ELISA Kit
Mouse angiopoietin 1 (ANG-1) ELISA Kit 小鼠血管生成素1(ANG-1)試劑盒
Ratprostatespecificaigen,PSAELISAKit 大鼠前列腺特異性抗原(PSA)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforGSH-Pxkit(human)人過氧化物酶試劑盒
細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白3(SI3)活性比色法定量試劑盒20次
Ratypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit大鼠原激活肽(TAP)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細(xì)胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,,漂浮,;
7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進(jìn)行分瓶試驗;
4,、長期培養(yǎng)時,,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,,以利細(xì)胞生長,;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行,。